乳酸菌复合物对肉鸡肠道形态结构及其生产性能的影响

发布时间：2016-06-17 05:59

第 1 章   文献综述

20 世纪 80 年代中期，全世界陆续采取一系列手段和措施禁止或限制畜禽养殖业使用抗生素，无抗生态养殖技术逐渐成为人们研究的热点之一[1]。益生菌添加剂是一种安全、绿色、活菌发酵的饲料添加剂，能够改善动物肠道菌群、形态结构，从而提高机体免疫机能、饲料利用率和动物产品质量、降低动物发病率、改善生态环境，保证了畜牧业的养殖效益和持续健康发展。因此益生菌添加剂的开发利用已被各国逐渐重视[2-4]。 

1.1  益生菌在畜牧业的应用现状

1.1.1  益生菌的概述
益生菌是对肠道菌群平衡具有重要作用的物质，能够通过改善动物肠道菌群平衡，从而促进动物机体生长的一种或多种微生物组合而成的活性微生物制剂[5]。2001 年，世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)将益生菌定义为：人体和动物摄取适当的量，对人体和动物的健康能发挥有效作用的活菌[6]。 畜牧业应用的益生菌种类较多，既可以用单一的纯菌种作为益生菌制剂，也可以用多种混合的菌种作为制剂。大量试验证明，复合益生菌的作用效果要比单一菌种的益生菌效果明显[7]。益生菌分布范围广、种类多，目前依据微生物菌种的类型可将益生菌划分为乳杆菌属、双歧杆菌属类和部分革兰氏阳性球菌类三大类。最常用的益生菌种类有双歧杆菌、乳酸杆菌和一些链球菌[8]。随着规模化养殖对畜禽产生的应激刺激因素增多，畜禽肠道微生物菌群极易被破坏，人们往往通过添加益生菌，以促进畜禽肠道微生物菌群的恢复。由于许多益生菌都是从不同环境中分离筛选出来，益生菌进入畜禽体内后，常因益生菌适于生存环境的差异大，难以适应畜禽机体内强酸、强碱等环境因素，从而影响了益生菌在肠道的黏附定植和生长繁殖，益生菌不能充分发挥其对畜禽机体的作用效果[9]。大量研究结果指出，许多细菌具有种属特异性，同源性细菌有利于在相同种属机体内定植，故比较理想的益生菌菌种最好是来自于与原宿主、原生态环境和原微生态系统相适应的同源动物肠道菌[10-11]。
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1.2  菊糖在畜牧业的应用现状
菊糖（Inulin）又称菊粉、土木香粉，是由 D-呋喃果糖经 β–（2，1）糖苷键连接多聚果糖，末端连接一个葡萄糖基，，聚合度 2～60，分子量为 3000～5000。菊糖在冷水中微溶，在热水中溶解迅速，与碘反应不显蓝色，无还原性，在水中呈左旋性质。菊糖广泛存在于自然界中，存在于海藻、植物、细菌和真菌中；目前菊糖的主要来源在植物，以能量的形式存在于多种植物中，尤其在菊科植物中含量大，例如菊芋、菊苣[36]。菊糖与寡聚糖一样，对动物肠道内的微生态体系起调节作用，能与病原菌的外源凝集素特异性相结合，使病原菌不能在肠道上粘附，而随排泄物经消化道排出体外；菊糖在大肠中发酵能够产生有机酸、SCFA 和气体能够促进大肠的蠕动，有利于这些物质向大肠后段运动，同时起到加快肠道排泄有害微生物的作用[37]。亦有报道称，菊糖为益生素的主要成分之一，其核心功能可以选择性地促进益生菌生长或活性的增加从而改善肠道菌群[38]。 
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第 2 章   鸡源乳酸菌的分离鉴定

越来越多的畜禽养殖生产实践证明，益生菌具有提高畜禽生产性能和增强对畜禽保健的作用，益生菌被看作替代抗生素的优势产品被广泛关注[34-36]。但从益生菌菌种的选择来看仍存在一些问题，主要是由于体外分离的益生菌不易存活，进入体内消化道系统经后，往往经受不住消化道强酸强碱的作用，此外益生菌属种的差异性使益生菌不利于在肠道内定植等问题导致了益生菌不能在动物机体内充分发挥功能[31,53]。本试验从太行鸡盲肠内分离筛选出鸡源性乳酸菌，为研发禽用微生物添加剂的菌种筛选提供思路。 

2.1   材料与方法 

从健康太行鸡的盲肠上刮取黏膜和内容物 1g，稀释于 9ml 无菌生理盐水中，充分震荡摇匀，吸取 1ml 混合液置于装有 9ml 生理盐水的无菌试管中，此稀释度为 10-1。重复以上稀释过程，稀释 7 次，吸取 10-5、10-6、10-7三个梯度的菌液0.5ml，利用平板涂布法分别均匀平铺于加有碳酸钙的 MRS 培养基平板上，待其完全吸收，37℃倒置培养 48h。选取不同形态的菌落进行镜检，将目标菌接种于MRS 培养基进行分离纯化培养，再将纯化的菌种接种于 MRS 斜面培养基中，37℃培养 48h 后，置于 4℃冰箱保存备用。 

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2.2   结果与分析
从加有碳酸钙的 MRS 培养基中选择产生溶钙圈菌落，分离筛选出 3 株乳酸菌，再根据细菌形态的镜检结果，将菌株分别编号为 B2、C2 和 L13，分离菌株的培养性状及形态学观察结果见表 2-3。青脚麻鸡等地方鸡是适于养殖环境条件相对恶劣的地方品种，具有耐粗饲、抗病和抗应激能力强等特性，它们长期形成的抗应激能力可以影响其肠道内微生物菌群各方面的机能[34-36]。王进[58]等选用地方青脚麻鸡对肉鸡肠道定殖菌的生活状态及分布进行了研究，结果显示芽孢菌分布在肠道中定植，酵母菌和乳酸菌的定殖较少。王立钧[59]等对东台地方草鸡的生长性能和空肠结构做出研究，结果显示低聚木糖与地衣芽孢杆菌以合生素形式添加到东台地方草鸡日粮中时可产生协同作用。王净[60]进行松针粉对柴鸡生产性能研究，可以很好改善生产性能。本试验试从太行鸡盲肠中分离乳酸菌，筛选出具有适应环境能力强的菌株，作为鸡源性乳酸菌菌种，达到满足鸡宿主特异性要求，为研制禽用的微生物添加剂提供比较理想的菌种来源。 
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第 3 章   乳酸菌复合物的体外抑制试验.......... 13 
3.1   材料与方法.......... 13 
3.2   结果与分析.......... 15 
3.3   讨论...... 17 
3.4   小结 ..... 18 
第 4 章   乳酸菌复合物对肉鸡肠道菌群...... 19 
4.1   材料与方法.......... 19
4.2   结果与分析.......... 21 
4.3   讨论...... 27 
4.4   小结...... 30

第 4 章  乳酸菌复合物对肉鸡肠道菌群和形态结构、生化指标及生产性能影响

随着畜禽养殖业的快速发展，抗生素对畜禽养殖行业带来的负面效应成为制约畜牧行业发展的不利因素，益生菌作为绿色健康的饲料添加剂正在逐渐替代抗生素已成为发展趋势之一[13,21]。李胜路等表明乳酸菌、菊糖可以改善鸡的肠道菌群和肠道结构及调节酶类的分泌，从而提高肉鸡的生产性能[34-36]。本试验主要研究菊糖和 3 株乳酸菌对肉鸡肠道菌群、肠道结构、血清生化指标和生产性能的联合作用，为微生态饲料添加剂的研发提供实验依据。用无菌剪刀剪开盲肠肠壁，刮取肠壁部分的肠道黏膜和内容物 1g，置于盛有 9ml 的无菌生理盐水的试管中,充分混匀，此时即为 10-1稀释度的菌液，重复以上过程，依次制成 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的菌液，选择 10-5、10-6、10-7三个梯度的菌液。由高稀释度开始，用微量取样器分别吸取 1mL 稀释液接种于 45℃左右的 MRS 培养基（加碳酸钙）和伊红美蓝培养基内，充分混匀，待其凝固，放到 37℃恒温培养箱中培养 24-48h，每稀释度做 3 个重复，测量乳酸菌和大肠杆菌的数量。细菌数量采用平板菌落计数法进行统计，依照《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》[73]（GB47892-2010）进行测定，最后用 1g 肠道内容物中细菌个数用(CFU)/g 表示。 
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结论

本研究从太行鸡肠道分离 3 株乳酸菌（短乳杆菌、粪肠球菌、盲肠肠球菌），观察了其凝集特性，探讨了乳酸菌复合物对 O78大肠杆菌的体外联合抑制作用，检测了其对肉鸡盲肠菌群、十二指肠和空肠形态结构、血清生化指标和生产性能的作用效果。得出如下结论： 
（1）分离的短乳杆菌、粪肠球菌、盲肠肠球菌 3 株乳酸菌中，自凝能力强的菌株，其互凝能力也强。 
（2）菊糖能促进益生菌对 O78大肠杆菌的抑菌作用，但此作用并不随菊糖浓度增加而显著增强。 
（3）乳酸菌复合物对肉鸡盲肠菌群生长繁殖均有不同程度的影响，14 日龄肉鸡盲肠益生菌数极显著升高；28 日龄肉鸡盲肠大肠杆菌数显著降低。 
（4）向肉鸡饮水中添加 3‰乳酸菌复合物，肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度、绒隐比均有显著变化；肉鸡血清碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、体重和料重比均有不同程度的改善。 
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参考文献(略)

本文编号：58120