橡胶树褐根病病菌LAMP快速检测方法的建立及应用

发布时间：2024-07-06 22:57

　　有害层孔菌(Phellinus noxius)引起的橡胶树(Hevea brasiliensis)褐根病是严重危害天然橡胶的一种根部病害。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术由于特异性强、灵敏度高、反应迅速、成本低等优势,已在植保等诸多领域得到广泛应用。为了建立一种能够快速、高效、准确地检测橡胶树褐根病菌的技术,本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂,建立了橡胶树褐根病菌有害层孔菌的环介导等温扩增可视化快速检测方法。根据橡胶树褐根病菌特异的核糖体转录间隔区序列设计了4条引物(2条内引物FIP/BIP, 2条外引物F3/B3)进行LAMP扩增。对LAMP反应条件和体系进行优化,并进行特异性和灵敏度验证,最后进行田间疑似褐根病样本验证。研究确定了最佳反应体系(25μL中模板100 ng/μL,外引物F3/B3各0.2μmol/L,内引物FIP/BIP各1.2μmol/L, dNTPs 1.4 mmol/L, Mg2+6 mmol/L,甜菜碱0.8mol/L, Bst DNA polymerase 8 U/μL)和反应...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 供试菌株
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 病原菌培养及核酸提取
        1.2.2 引物设计与合成
        1.2.3 LAMP反应体系及反应条件优化
        1.2.4 特异性验证
        1.2.5 灵敏度检测
            1.2.5. 1 基因组DNA灵敏度检测
            1.2.5. 2 LAMP与普通PCR灵敏度比较
        1.2.6 田间样本检测
2 结果与分析
    2.1 LAMP检测体系的优化
        2.1.1 LAMP反应体系优化
        2.1.2 反应条件优化
    2.2 LAMP特异性检测
    2.3 LAMP灵敏度检测
        2.3.1 橡胶树褐根病菌基因组灵敏度检测
        2.3.2 LAMP与普通PCR灵敏度比较
    2.4 田间样本检测
3 讨论
4 结论



本文编号：4002761