一种适于PCR扩增的茶树基因组DNA快速提取方法

发布时间：2021-08-08 23:59

　　为了建立一种从茶树嫩叶中快速提取基因组DNA的方法,笔者通过采用常温研磨、常温裂解、一步抽提等措施对CTAB提取法进行了改良和简化,省去了DNA纯化和使用RNase酶降解RNA两个环节。使用该方法以茶树嫩叶为材料提取基因组DNA,并进行紫外光谱法、琼脂糖电泳、PCR扩增等方式检测。结果表明,该方法提取的DNA,其260 nm/280 nm吸光度比值介于1.81～1.84,260 nm/230 nm吸光度在1.75～1.88;经琼脂糖凝胶电泳检测,获得的DNA条带较亮且无明显拖尾现象;利用ISSR引物进行PCR检测,能够获得清晰稳定条带。说明该方法操作快速简便,提取的基因组DNA能够满足PCR反应需要。 

【文章来源】：茶叶通讯. 2020,47(04)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

6份茶树基因组DNA的电泳图谱

在去除蛋白、酚类、RNA等杂质时，一般都会在粗提之后进行纯化，粗提时进行两次（采用氯仿∶异戊醇∶乙醇）抽提、纯化时一次抽提以及使用RNase酶降解RNA，虽然有部分研究[3,4]在粗提DNA和纯化过程中分别只进行了一次抽提，但在整个提取过程中共实施了两次抽提。本试验中，省去了DNA纯化和使用RNase酶降解RNA两个环节，并只在DNA粗提时进行一次抽提，依然获取了较高质量DNA，扩增出了清晰稳定的茶树ISSR图谱，这是因为减少了氯仿等有机溶剂对DNA降解的影响、RNA在提取过程中会逐步自然降解以及PCR反应对模板DNA的纯度要求并不是很高。因此，本方法采用常温研磨、常温裂解、一步抽提，省去DNA纯化和使用RNase酶降解RNA两个环节，降低了操作难度，简化了提取步骤，为现有报道中较为简便的茶树全基因组DNA提取方法[1-9]，且所获得全基因组DNA量较大、降解较少、纯度较高，是一种简单快速、可用于PCR反应的茶树全基因组DNA提取方法。

【参考文献】：
期刊论文
[1]一种从富含次生代谢产物茶树嫩叶中高效提取基因组DNA的方法[J]. 唐祥凯,谭和平,沈兴中,李怀平,许洋,管驰.  中国测试. 2015(09)
[2]茶树种质资源AFLP分析中DNA模板快速制备方法[J]. 周李华,赵超艺,罗军武,黄建安,谭和平.  食品科学. 2007(02)
[3]茶树基因组DNA的高效提取方法[J]. 黄建安,黄意欢,罗军武,王坤波,周李华.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2003(05)
[4]茶树基因组DNA提取纯化技术研究[J]. 罗军武,沈程文,施兆鹏,刘永胜,龚志华,黄意欢.  茶叶通讯. 2002(04)
[5]从富含酚类的茶类植物叶中提取纯净的总DNA[J]. 袁长春,施苏华,叶创兴.  中山大学学报论丛. 2001(03)
[6]茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立[J]. 谭和平,余桂容,徐利远,蔡平钟,吴洁.  西南农业学报. 2001(01)
[7]云南茶树DNA提取和RAPD分子标记初探[J]. 高峻,蔡新,许明辉.  云南农业大学学报. 2000(02)
[8]茶树基因组DNA提纯与鉴定[J]. 陈亮,陈大明,高其康,杨亚军,虞富莲.  茶叶科学. 1997(02)
[9]茶树叶片DNA提取、纯化与检测[J]. 朱旗,任春梅,洪亚辉,罗军武.  湖南农学院学报. 1994(02)



本文编号：3330938