茶树CCoAOMT原核表达及酶促条件优化

发布时间：2023-01-25 20:26

　　优化了重组茶树咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶基因（CCoAOMT）在大肠杆菌中的表达,采用Ni–NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）为底物,进行体外酶促反应,采用HPLC测定反应产物EGCG3"Me的生成量。结果表明,CCoAOMT在E.coliBL21中能够高效表达,最优条件为诱导温度37℃,诱导时间4 h,异丙基–β–D–硫代半乳糖苷（IPTG）浓度0.5 mmol/L;重组蛋白经Ni–NTA亲和层析柱梯度洗脱达到了较好的纯化效果;重组酶在体外能够催化EGCG,合成EGCG3"Me,底物EGCG最佳浓度为0.05 mmol/L,最适温度为37℃,最适pH值为4。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重组表达载体的构建
        1.2.2 原核表达条件的优化及蛋白纯化
        1.2.3 酶促反应条件优化
2 结果与分析
    2.1 p ET–28a–CCo AOMT重组质粒的鉴定
    2.2 重组茶树p ET–28a–CCo AOMT的诱导表达
    2.3 重组蛋白CCo AOMT的纯化
    2.4 酶促产物的HPLC分析
    2.5 不同酶促反应条件下的产物生成量
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3731755