早产儿颅内出血后VEGF 和PLT数波动及关联性研究

前 言

近年来，随着围生医学及新生儿医学的发展与进步，早产儿的死亡率逐渐下降，但相应的早产儿并发症却有上升趋势，神经系统的并发症更成为重中之重。其中较为常见与严重的是早产儿颅内出血（ICH），而脑室内出血(IVH)又占很大比例。早产儿脑室内出血根据出血量及出血部位的不同，其临床表现、病情发展及预后也不尽相同。早产儿发生脑室内出血后，其病程好像更加严重, 出血后脑积水和死亡等不良预后的发生率较高[1]。其存活者中部分留有癫痫、运动障碍等远期后遗症，所造成的脑损伤往往是不可逆的，严重影响患儿以后的生活质量。如何迅速诊断和治疗早产儿颅内出血，提高颅内出血早产儿的生存质量，逐渐成为大家关注的重点。血管内皮生长因子（VEGF）是一类糖蛋白，具有促进内皮细胞分裂的作用，尤其可以特异性的促血管内皮细胞分裂生长。 同时具有诱导血管生成、使血管通透性增高以及促进细胞质内钙聚集等作用[2]。各种应激反应如缺氧缺血、炎症反应等均可以诱导 VEGF 的表达,其中缺氧缺血是各类细胞中 VEGF 表达的强烈诱发因素，从而使 VEGF 参与缺氧缺血组织的损害和修复过程。人体在脑出血后发生了连续性变化，有研究显示, 无论脑出血后采取任何治疗方法,出血灶和对侧脑血流量均下降,并可持续很长时间[3]。
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第一章 资料与方法

1．研究对象
收集 2012 年 12 月 －2013 年 5 月在山西省儿童医院急救中心住院的早产儿 60 例。入选标准： ①早产儿；②出生 24 h 内入院。观察组新生儿具备以下条件: ①均满足新生儿颅内出血的诊断标准，目前依据患儿病史、临床表现及影像学检查综合考虑。因头颅 B 超对新生儿颅内出血的病变部位分辨率高，特异性强，所以成为颅内出血的主要诊断手段。根据头颅超声检查可以明确出血类型。对出血程度及出血部位进行分度，采用 Papile 分度法[8]:Ⅰ度,单纯室管膜下生发基质出血，可以伴有极少量脑室内出血;Ⅱ度,脑室内出血，无脑室扩大;Ⅲ度,脑室内出血同时伴有脑室扩大;Ⅳ度,脑室内出血、脑室扩大，同时伴脑室旁白质损伤或发生出血性梗死；②选择生后 1-3 天之内已明确诊断颅内出血病例，并根据头颅 B 超显示出血程度Ⅱ度以上的患儿。对照组新生儿具备以下条件：①无颅内出血；②生后头颅超声检查未显示颅内出血。排除标准：两组均须排除：①重度窒息、新生儿缺氧缺血性脑病、新生儿呼吸窘迫综合征、先天畸形、重症感染、遗传代谢性疾病、自身免疫性疾病、出血及凝血障碍疾病者；②入院 10 天内出院或死亡者；③病例资料不完整者。

2．研究方法
人血管内皮生长因子（Human-VEGF）试剂盒是一种双抗体夹心法酶联免疫吸附实验。进行检测的是已知 Human-VEGF 浓度的标准品和未知浓度的样品。将它们加入预包被的抗人-VEGF 单克隆抗体微孔酶标板内，标准品及样品中所含的 VEGF 与酶标板单抗结合反应后，，将未反应的游离成分洗去。然后加入生物素化的抗人-VEGF 抗体，结合在酶标板单抗上的 Human-VEGF 与抗人-VEGF 抗体反应后形成免疫复合物，洗去未反应的细胞因子及抗体。接着加入亲和素（标记酶为辣根过氧化物酶），免疫复合物与亲和素反应结合，洗去未反应的游离因子。最后加入显色剂，含 VEGF 的复合物与显色剂结合后呈现蓝色，此时加入终止液会变成黄色，并且 VEGF 含量越多，颜色越重。VEGF 的定量检测是用酶标仪在波长 450nm 下测 OD 值，OD450 值越高，标本中 VEGF 含量越多，绘制标准曲线后，计算出标本中 VEGF 浓度。

资料与方法………………………… 8

结果与分析……13

讨 论……………………… 18

结 论………………… 24

第三章 讨 论

1．ICH 与 VEGF
本研究结果显示，颅内出血早产儿生后1-3d血清VEGF水平高于对照组,且生后7-10d增高更加显著,两组比较差异均有统计学意义，表明VEGF参与了早产儿颅内出血的病理改变及出血灶和周围组织损伤的修复过程。有动物实验表明[4]，脑出血后，血肿周围组织细胞中VEGF会随着出血时间的延长而表达增多,同时以FⅧ-RAg(标记新生血管，由内皮细胞合成)标记的微血管内皮细胞数量在出血后12 h-7 d也呈逐渐增多的趋势。本研究结果中早产儿颅内出血后VEGF水平升高与此一致，呈逐渐增高趋势。VEGF动态变化可能是因为颅内出血早产儿在生后1-3d，脑组织缺血缺氧，强烈诱导VEGF高表达，进而增加血管通透性，破坏血脑屏障并形成脑水肿，促使血清VEGF水平升高。而颅内出血早产儿生后7-10d脑缺血缺氧逐渐缓解，组织修复逐渐增多，病变及周围微血管开始修复，为了新血管形成和改善微循环，表达VEGF的组织细胞明显增加，使得VEGF大量产生及分泌，与血管内皮细胞的特异受体结合后，诱导内皮细胞增殖，促进血管形成。故颅内出血早产儿生后7-10d VEGF升高更加显著。

2．ICH 与血小板参数
早产儿颅内出血可以由多种因素所致，包括血管内因素、血管因素和血管外因素，各种因素可以单一作用或共同作用而发病。早产儿颅内出血多始发于生发基质和脉络丛，该部位的解剖结构有如下特点[15.16]：（1）生发基质是胎儿的胶质细胞和胚胎的神经元所在地，在胎龄 26-32 周，该区的血管密度大，分布面积明显高于白质区，但血管壁常常由单层内皮细胞构成，血管走形不规则，缺少平滑肌及弹力纤维的支持，故对血流改变及血压变化比较敏感，血流冲击后其对抗能力较差，易破裂导致出血。随着胎儿发育，胚芽组织的基质逐渐衰减，等到胎龄 36 周时几乎全部消失，血管的支持组织也变得强大，此时颅内出血的发生率会有所下降。
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第四章 结 论

1 VEGF 及 PLT 参与了早产儿颅内出血后的病理生理变化和损伤组织的修复过程。
2 VEGF 及血小板参数的联合动态检测对于判断早产儿颅内出血的病情演变及发展有一定的指导意义。
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参考文献（略）