梅雌蕊激光捕获显微切割体系及微量RNA提取方法的建立

发布时间：2021-08-14 16:04

　　【目的】建立一套利用激光捕获显微切割技术切取梅（Prunus mume Sieb. et Zucc.）的雌蕊并提取微量RNA的技术体系。【方法】以梅品种‘大嵌蒂’和‘龙眼’的花芽和雌蕊为实验材料,制作石蜡切片,比较不同厚度条带的切割效果并选取最佳的条带厚度制作切片;以Leica LMD 7 000激光捕获显微切割系统为实验核心,比较不同激光强度的切割效果,选取切割效果最好的激光强度,分别切取2个梅品种的雌蕊,比较常温保存与液氮保存切割后样品所提取的RNA质量,最终建立适合于梅的激光捕获显微切割提取微量RNA的最佳体系。【结果】在石蜡切片制作过程中,改进了试验材料的贮藏条件（在4℃冰箱低温贮藏）,即除渗蜡和制片之外,其他如脱水、透明等步骤都在4℃冰箱中进行,而后再切片制片。经过反复比较,成功确定石蜡切片的最佳条带厚度为10μm,激光捕获显微切割效果最好的激光强度为30,并且明确切割后液氮保存的切割材料所提取RNA的RIN值比常温保存的高。【结论】改进了石蜡切片制作过程中某些步骤中材料的贮藏温度,确定了适合于梅花芽的切片厚度以及显微切割激光强度,建立了相对简单、稳定且重复性好的利用石蜡切片... 

【文章来源】：果树学报. 2020,37(10)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

不同厚度的切片的切割效果

在激光捕获显微切割过程中收集到的雌蕊组织样品，提取RNA并且经过检测后，其质量如表2所示。比较切割完成后未将PCR管置入液氮与切割完成立即将PCR管置入液氮保存的两种情况，提取的RNA经过检测后表明，未置入液氮保存而获得的样品（2号）RIN值较低，RNA降解比较严重，且浓度较低，完整度也较低，而置入液氮保存中而获得的样品（1号）RIN值较高，RNA质量相对较好，浓度高，完整度也比较好。本试验中每个样品所获得的RNA产量约为60 ng。RIN(RNA Integrity Number）为RNA的完整性计数，RIN范围为1～10，代表不同的RNA质量，其中，1代表RNA降解，10代表RNA的完整性高。图4 显微切割雌蕊组织的过程

显微切割雌蕊组织的过程

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3342766