一种大量提取猕猴桃不同组织高质量总RNA的方法
发布时间：2021-08-17 07:04
在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织（果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根）的总RNA。利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度。结果显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A260/A280值在1.8～2.0间,A260/A230值大于2.0。进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求。因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取。
【文章来源】：江西农业学报. 2020,32(09)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
用试剂盒法提取的总RNA电泳图
利用购自大连宝生物工程有限公司的逆转录试剂盒对两种方法提取得到的猕猴桃各组织的总RNA进行逆转录,获得了cDNA的第一条链。进一步选取内参基因18S rRNA设计特异性引物,以逆转录得到的cDNA第一链为模板,进行RT-PCR,检测提取得到的总RNA的质量。图3的电泳图显示,采用两种方法分别提取的猕猴桃7个组织的总RNA都能扩增得到与目的条带大小相符的单一条带。对所有扩增条带进行测序,测序结果与18s rRNA的序列均一致。这表明,采用两种方法提取得到的总RNA的质量较高,这两种方法适于猕猴桃不同组织总RNA的提取。表1 采用两种方法提取猕猴桃7种组织的总RNA的纯度和浓度 组织 改良的CTAB法 试剂盒法 OD260/OD280 OD260/OD230 浓度/(ng/μL) OD260/OD280 OD260/OD230 浓度/(ng/μL) 果实 1.81 2.01 2834.3 1.96 2.31 887.4 雄花 1.86 2.11 2027.2 1.84 2.28 786.6 雌花 1.93 2.14 2011.8 1.86 2.26 801.2 根 1.85 2.05 1688.6 1.95 2.19 690.2 叶片 1.88 2.18 2523.4 1.84 2.25 801.2 皮 1.92 2.20 1823.2 1.91 2.37 730.5 种子 1.90 2.15 1977.6 1.87 2.22 810.7
采用本实验室改良的CTAB法和无氯仿多糖多酚植物RNA提取试剂盒两种方法分别提取了猕猴桃果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮和根共7个组织的总RNA。如图1和图2所示,采用改良的CTAB法和试剂盒法都能在猕猴桃的7个组织中提取到总RNA,能看到有18S和28S两条清晰条带,其中28S条带的亮度是18S条带亮度的2倍左右,且两条带之间没有明显的拖尾现象。这表明这两种方法都适用于猕猴桃不同组织中总RNA的提取,都能获得完整性较高的总RNA。2.2 RNA的纯度和浓度检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究[J]. 陶倩,范慧艳,张水利,陈如兵,楼柯浪,张春椿. 中华中医药杂志. 2018(08)
[2]一种快速提取猕猴桃RNA的新方法[J]. 邓浪,包昌艳,周军,王连春,刘惠民,纪晴,沈兵琪,周凡,王大玮. 分子植物育种. 2018(10)
[3]猕猴桃溃疡病菌的分子检测技术研究[J]. 邵宝林,刘瑶,朱天辉,李姝江. 植物病理学报. 2013(05)
[4]红肉猕猴桃种质资源果实性状及AFLP遗传多样性分析[J]. 岁立云,刘义飞,黄宏文. 园艺学报. 2013(05)
[5]拟南芥中热胁迫相关microRNA的差异表达[J]. 冯静弦,汪启明,胡琪,饶力群. 湖南农业科学. 2012(03)
[6]一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法[J]. 刘胜洪,刘文,刘明峰,杨凤婷,刘庆生,梁红. 生物技术通报. 2011(09)
[7]提取猕猴桃果实总RNA的新方法[J]. 梅晓宏,高红岩,罗云波. 中国食品学报. 2007(03)
[8]一种高效提取棉花不同组织总RNA的热硼酸改良法[J]. 武耀廷,刘进元. 棉花学报. 2004(02)
[9]排除棉酚等干扰提取棉纤维细胞RNA方法的研究[J]. 徐亚浓,王学德,蒋淑丽,程超华. 棉花学报. 2002(03)
本文编号：3347307
【文章来源】：江西农业学报. 2020,32(09)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
用试剂盒法提取的总RNA电泳图
利用购自大连宝生物工程有限公司的逆转录试剂盒对两种方法提取得到的猕猴桃各组织的总RNA进行逆转录,获得了cDNA的第一条链。进一步选取内参基因18S rRNA设计特异性引物,以逆转录得到的cDNA第一链为模板,进行RT-PCR,检测提取得到的总RNA的质量。图3的电泳图显示,采用两种方法分别提取的猕猴桃7个组织的总RNA都能扩增得到与目的条带大小相符的单一条带。对所有扩增条带进行测序,测序结果与18s rRNA的序列均一致。这表明,采用两种方法提取得到的总RNA的质量较高,这两种方法适于猕猴桃不同组织总RNA的提取。表1 采用两种方法提取猕猴桃7种组织的总RNA的纯度和浓度 组织 改良的CTAB法 试剂盒法 OD260/OD280 OD260/OD230 浓度/(ng/μL) OD260/OD280 OD260/OD230 浓度/(ng/μL) 果实 1.81 2.01 2834.3 1.96 2.31 887.4 雄花 1.86 2.11 2027.2 1.84 2.28 786.6 雌花 1.93 2.14 2011.8 1.86 2.26 801.2 根 1.85 2.05 1688.6 1.95 2.19 690.2 叶片 1.88 2.18 2523.4 1.84 2.25 801.2 皮 1.92 2.20 1823.2 1.91 2.37 730.5 种子 1.90 2.15 1977.6 1.87 2.22 810.7
采用本实验室改良的CTAB法和无氯仿多糖多酚植物RNA提取试剂盒两种方法分别提取了猕猴桃果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮和根共7个组织的总RNA。如图1和图2所示,采用改良的CTAB法和试剂盒法都能在猕猴桃的7个组织中提取到总RNA,能看到有18S和28S两条清晰条带,其中28S条带的亮度是18S条带亮度的2倍左右,且两条带之间没有明显的拖尾现象。这表明这两种方法都适用于猕猴桃不同组织中总RNA的提取,都能获得完整性较高的总RNA。2.2 RNA的纯度和浓度检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究[J]. 陶倩,范慧艳,张水利,陈如兵,楼柯浪,张春椿. 中华中医药杂志. 2018(08)
[2]一种快速提取猕猴桃RNA的新方法[J]. 邓浪,包昌艳,周军,王连春,刘惠民,纪晴,沈兵琪,周凡,王大玮. 分子植物育种. 2018(10)
[3]猕猴桃溃疡病菌的分子检测技术研究[J]. 邵宝林,刘瑶,朱天辉,李姝江. 植物病理学报. 2013(05)
[4]红肉猕猴桃种质资源果实性状及AFLP遗传多样性分析[J]. 岁立云,刘义飞,黄宏文. 园艺学报. 2013(05)
[5]拟南芥中热胁迫相关microRNA的差异表达[J]. 冯静弦,汪启明,胡琪,饶力群. 湖南农业科学. 2012(03)
[6]一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法[J]. 刘胜洪,刘文,刘明峰,杨凤婷,刘庆生,梁红. 生物技术通报. 2011(09)
[7]提取猕猴桃果实总RNA的新方法[J]. 梅晓宏,高红岩,罗云波. 中国食品学报. 2007(03)
[8]一种高效提取棉花不同组织总RNA的热硼酸改良法[J]. 武耀廷,刘进元. 棉花学报. 2004(02)
[9]排除棉酚等干扰提取棉纤维细胞RNA方法的研究[J]. 徐亚浓,王学德,蒋淑丽,程超华. 棉花学报. 2002(03)
本文编号：3347307
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