尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌拮抗菌的筛
发布时间：2021-08-26 08:36
从蚯蚓粪中筛选出一株能抑制尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌的拮抗菌株,并通过优化培养条件以提高抑菌能力。以尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌为供试病原菌,以蚯蚓粪为供试材料,通过平板稀释法和平板对峙法中筛选到一株能较好抑制尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌的菌株WQ-5,通过形态学观察、生理生化特征和16S rRNA序列分析,初步鉴定其种属。通过单因素和响应面分析法对该菌的培养条件进行优化。通过防效试验验证其防效。菌株WQ-5为解淀粉芽孢杆菌,其最适培养条件为果糖 30 g/L,酵母粉18.9 g/L,硫酸镁3 g/L,甘油1 g/L,磷酸氢二钾1.5 g/L,pH 5.8,装液量38.6%,转速240 r/min,接种量5%和温度30℃。优化后对黄瓜枯萎病菌的抑菌直径和抑菌率较优化前分别提高了24.8%和30.39%。防效试验表明,菌株WQ-5使种子发病率降低了20%,发芽率提高了150%,种子的根长、茎长和活力指数显著提高,植株病情指数下降了48.65%,防治效果为51.67%。菌株WQ-5对黄瓜枯萎病菌有较好防效,具有潜在的研究和应用价值。
【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(09)北大核心CSCD
【文章页数】：12 页
【部分图文】：
菌株WQ-5基于16S rRNA基因序列的系统发育进化树
表2 9株细菌对尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌抑制作用的筛选结果 菌株 6 d 9 d 12 d 抑菌直径/mm 抑菌率/% 抑菌直径/mm 抑菌率/% 抑菌直径/mm 抑菌率/% WQ-1 25.05±0.74a 26.99±2.68a 21.75±3.48b 75.46±5.10b 20.88±2.97b 78.94±3.95a WQ-2 24.89±0.52a 27.56±1.91a 24.88±1.14b 70.88±1.69a 24.38±1.33a 74.3±1.76ab WQ-3 20.23±3.36a 44.52±12.23a 20±3.20b 78.02±4.7a 25.25±0.48a 73.13±0.64ab WQ-4 19.35±1.10a 47.73±4.01a 21.75±0.72b 75.46±1.06a 19.36±2.83b 80.93±3.76a WQ-5 18.6±2.77a 50.46±10.09a 17.75±2.25b 81.32±3.3a 18.00±2.56b 82.75±3.76a WQ-6 18.76±3.68a 49.89±13.41a 24.75±0.78b 71.06±1.14a 24.88±0.9a 73.63±1.19ab WQ-7 20.68±1.81a 42.87±6.6a 20.75±1.38b 76.92±2.02a 21.62±1.91b 77.94±2.53a WQ-8 20.82±0.79a 42.38±2.86a 20.13±0.31b 77.84±0.46a 19.12±1.91b 81.26±2.53a WQ-9 27.27±0.73a 18.89±2.66a 32.75±0.66a 59.34±0.97a 30.75±2.75a 65.84±3.65b 注:同列数据后不同字母表示差异显著(P<0.05)。下同2.2 拮抗菌WQ-5的鉴定
表3 WQ-5菌株的生理生化实验结果 实验项目 结果 实验项目 结果 淀粉水解Starch hydrolysis + 耐盐实验 Salttolerance 接触酶试验Catalase test + 2%Nacl + V-P试验Voges-Proskauertest + 5%Nacl + 利用柠檬酸盐Citrate utilization + 7%Nacl - 明胶液化Hydrolysis of gelatin + 10%Nacl - 甲基红试验Methyl red test + 生长实验 Growth 脲酶试验Urease test + 4℃ - 苯丙氨酸脱氢酶实验phenylalanine dehydrogenase test - 20℃ - 吲哚试验Indole test - 30℃ + 蔗糖发酵Sucrose fermentation + 37℃ + 甘露醇发酵Mannitol fermentation + 60℃ - D-木糖 D-Xylose + 注:“+”和“-”分别表示阳性和阴性。将菌株WQ-5基因序列(1 423 bp)提交至GenBank 数据库进行BLAST相似性比对,登录号为MN736614,并构建系统发育进化树。结果显示,菌株WQ-5与Bacillus amyloliquefaciens一致性达到100%(图3),生理生化指标也与之相符,故菌株WQ-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]解淀粉芽胞杆菌JNC2摇瓶发酵条件优化[J]. 梁艳琼,吴伟怀,习金根,李锐,郑金龙,黄兴,贺春萍,易克贤. 草业科学. 2019(08)
[2]黄瓜枯萎病研究进展[J]. 杨侃侃,刘晓虹,陈宸,黄亚莉,周赓,梁志怀,陈惠明. 湖南农业科学. 2019(06)
[3]对番茄枯萎病具防效的海洋源赤杆菌YH-07的发酵条件探究[J]. 唐彤彤,孙星,董元华,刘勤. 中国生物防治学报. 2018(05)
[4]黄瓜枯萎病研究进展[J]. 徐彦刚,贺振,李瑞,李良俊. 中国瓜菜. 2018(06)
[5]一株植物病原拮抗细菌的分离筛选及拮抗物质[J]. 陈志杰,谢江辉,陈宇丰,周登博,高祝芬,戚春林. 生态学杂志. 2018(05)
[6]海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株粉剂对黄瓜的促生防病作用[J]. 李欢,曹雪梅,陈茹,贾杰,马桂珍,暴增海. 河南农业科学. 2017(12)
[7]响应面法优化巴旦木粕蛋白的提取工艺研究[J]. 杨晓平,孙乾,孔令明. 农产品加工. 2017(20)
[8]对黄瓜枯萎病具防效的海洋源芽孢杆菌Y3F的鉴定[J]. 陈香,唐彤彤,孙星,刘勤. 微生物学通报. 2017(10)
[9]河西走廊盐碱土壤中抗马铃薯干腐病放线菌的筛选鉴定[J]. 牛世全,李渭娟,李海云,惠娜娜,龙洋. 西北师范大学学报(自然科学版). 2017(02)
[10]蚯蚓粪配施化肥对玉米根际土壤生物学特征的影响[J]. 徐宪斌. 水土保持通报. 2017(01)
硕士论文
[1]黄瓜枯萎病拮抗细菌的筛选、发酵及生防机理研究[D]. 祝久香.中南林业科技大学 2019
[2]拮抗细菌的分离鉴定及其对苦瓜枯萎病生防潜力的研究[D]. 崔宁.山东农业大学 2017
[3]内生真菌对黄瓜土传病害的抑制作用[D]. 吕恒.河南科技大学 2015
本文编号：3363918
【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(09)北大核心CSCD
【文章页数】：12 页
【部分图文】：
菌株WQ-5基于16S rRNA基因序列的系统发育进化树
表2 9株细菌对尖镰孢黄瓜专化型枯萎病菌抑制作用的筛选结果 菌株 6 d 9 d 12 d 抑菌直径/mm 抑菌率/% 抑菌直径/mm 抑菌率/% 抑菌直径/mm 抑菌率/% WQ-1 25.05±0.74a 26.99±2.68a 21.75±3.48b 75.46±5.10b 20.88±2.97b 78.94±3.95a WQ-2 24.89±0.52a 27.56±1.91a 24.88±1.14b 70.88±1.69a 24.38±1.33a 74.3±1.76ab WQ-3 20.23±3.36a 44.52±12.23a 20±3.20b 78.02±4.7a 25.25±0.48a 73.13±0.64ab WQ-4 19.35±1.10a 47.73±4.01a 21.75±0.72b 75.46±1.06a 19.36±2.83b 80.93±3.76a WQ-5 18.6±2.77a 50.46±10.09a 17.75±2.25b 81.32±3.3a 18.00±2.56b 82.75±3.76a WQ-6 18.76±3.68a 49.89±13.41a 24.75±0.78b 71.06±1.14a 24.88±0.9a 73.63±1.19ab WQ-7 20.68±1.81a 42.87±6.6a 20.75±1.38b 76.92±2.02a 21.62±1.91b 77.94±2.53a WQ-8 20.82±0.79a 42.38±2.86a 20.13±0.31b 77.84±0.46a 19.12±1.91b 81.26±2.53a WQ-9 27.27±0.73a 18.89±2.66a 32.75±0.66a 59.34±0.97a 30.75±2.75a 65.84±3.65b 注:同列数据后不同字母表示差异显著(P<0.05)。下同2.2 拮抗菌WQ-5的鉴定
表3 WQ-5菌株的生理生化实验结果 实验项目 结果 实验项目 结果 淀粉水解Starch hydrolysis + 耐盐实验 Salttolerance 接触酶试验Catalase test + 2%Nacl + V-P试验Voges-Proskauertest + 5%Nacl + 利用柠檬酸盐Citrate utilization + 7%Nacl - 明胶液化Hydrolysis of gelatin + 10%Nacl - 甲基红试验Methyl red test + 生长实验 Growth 脲酶试验Urease test + 4℃ - 苯丙氨酸脱氢酶实验phenylalanine dehydrogenase test - 20℃ - 吲哚试验Indole test - 30℃ + 蔗糖发酵Sucrose fermentation + 37℃ + 甘露醇发酵Mannitol fermentation + 60℃ - D-木糖 D-Xylose + 注:“+”和“-”分别表示阳性和阴性。将菌株WQ-5基因序列(1 423 bp)提交至GenBank 数据库进行BLAST相似性比对,登录号为MN736614,并构建系统发育进化树。结果显示,菌株WQ-5与Bacillus amyloliquefaciens一致性达到100%(图3),生理生化指标也与之相符,故菌株WQ-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]解淀粉芽胞杆菌JNC2摇瓶发酵条件优化[J]. 梁艳琼,吴伟怀,习金根,李锐,郑金龙,黄兴,贺春萍,易克贤. 草业科学. 2019(08)
[2]黄瓜枯萎病研究进展[J]. 杨侃侃,刘晓虹,陈宸,黄亚莉,周赓,梁志怀,陈惠明. 湖南农业科学. 2019(06)
[3]对番茄枯萎病具防效的海洋源赤杆菌YH-07的发酵条件探究[J]. 唐彤彤,孙星,董元华,刘勤. 中国生物防治学报. 2018(05)
[4]黄瓜枯萎病研究进展[J]. 徐彦刚,贺振,李瑞,李良俊. 中国瓜菜. 2018(06)
[5]一株植物病原拮抗细菌的分离筛选及拮抗物质[J]. 陈志杰,谢江辉,陈宇丰,周登博,高祝芬,戚春林. 生态学杂志. 2018(05)
[6]海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株粉剂对黄瓜的促生防病作用[J]. 李欢,曹雪梅,陈茹,贾杰,马桂珍,暴增海. 河南农业科学. 2017(12)
[7]响应面法优化巴旦木粕蛋白的提取工艺研究[J]. 杨晓平,孙乾,孔令明. 农产品加工. 2017(20)
[8]对黄瓜枯萎病具防效的海洋源芽孢杆菌Y3F的鉴定[J]. 陈香,唐彤彤,孙星,刘勤. 微生物学通报. 2017(10)
[9]河西走廊盐碱土壤中抗马铃薯干腐病放线菌的筛选鉴定[J]. 牛世全,李渭娟,李海云,惠娜娜,龙洋. 西北师范大学学报(自然科学版). 2017(02)
[10]蚯蚓粪配施化肥对玉米根际土壤生物学特征的影响[J]. 徐宪斌. 水土保持通报. 2017(01)
硕士论文
[1]黄瓜枯萎病拮抗细菌的筛选、发酵及生防机理研究[D]. 祝久香.中南林业科技大学 2019
[2]拮抗细菌的分离鉴定及其对苦瓜枯萎病生防潜力的研究[D]. 崔宁.山东农业大学 2017
[3]内生真菌对黄瓜土传病害的抑制作用[D]. 吕恒.河南科技大学 2015
本文编号：3363918
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