凤丹牡丹胚培养体系建立及初代畸形苗甲基化变异分析

发布时间：2024-03-23 03:47

　　为提高凤丹牡丹组培技术在生产实践中的应用效率,以当年采收油用牡丹凤丹成熟种胚为外植体进行离体培养,设置不同光照及温度培养条件、不同大小成熟种胚、不同植物生长调节剂配比、不同质量浓度外源添加物等处理,完善凤丹牡丹胚培养体系;运用甲基化敏感多态性技术(MSAP)对培养过程中出现的畸形组培苗进行甲基化水平及模式变异的分析。结果表明,试验范围内最优培养条件为接种后进行7 d暗培养随即转入光照培养,适宜培养温度为(25±1)℃;适宜外植体为≥3 mm的成熟种胚;最优植物生长调节剂配比为0.8 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,其基础培养基为改良MS(Ca²⁺加倍)培养基;与不添加外源物质相比,凤丹牡丹胚乳的添加对成苗率具有极显著抑制作用,添加75 mL/L椰汁处理组培养效果较好,成苗率为85.66%,添加1.0 g/L活性炭处理组成苗率最高,为90.46%。相较于正常组培苗,畸形苗总扩增位点数增多21.20%,总甲基化位点数减少12.97%;正常组培苗总甲基化率为85.38%,畸形苗总甲基化率为74.30%;畸形苗甲基化多态型变异占主导(82.37%),其中去甲...

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图1凤丹牡丹胚培养正常组培苗(A)和畸形组培苗(B)

以相同培养条件下初代培养正常组培苗与畸形组培苗(图1)为材料,使用改良版CTAB法提取基因组DNA。纯化后的DNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性。用NanoPhotometer(IMPLEN,德国)分光光度计检测DNA样品纯度及浓度。其中畸形组培苗判断标准为:畸形苗两子叶间不长....

图2凤丹牡丹成熟种胚培养效果

图2A为空白对照组,即基础MS培养基中凤丹牡丹成熟种胚培养效果,可以看出,子叶舒展真叶纤细弱小;图2B为Z6处理,即添加0.8mg/LNAA+1.0mg/L6-BA处理组培养效果,可以看出,该组试管苗苗体稍壮,叶柄叶片较细;图2C为D3处理,即添加75mL/L椰汁处理组....

图3凤丹牡丹畸形组培苗MASP扩增的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果

选用30对特异性引物进行筛选,最终确定使用26对引物进行畸形组培苗DNA甲基化水平分析,得到相关聚丙烯酰胺凝胶电泳图(图3)。根据显影结果可知,泳道内共呈现4种条带类型,分别为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型,分别代表4种DNA甲基化模式,依次为非甲基化、半甲基化、全甲基化和超甲基化。由....

本文编号：3935409