华北耧斗菜不同组织总DNA提取效果比较试验研究

发布时间：2024-05-11 12:12

　　为进一步开发利用华北耧斗菜资源并对其开展分子生物学研究,利用改良CTAB法提取华北耧斗菜植株的根、茎、叶、花和种子等5种组织总DNA,通过观察提取过程中各组织的表现和紫外分光光度计检测提取的总DNA,旨在找到最适宜提取总DNA的华北耧斗菜组织材料。结果表明:华北耧斗菜根、茎、叶、花和种子5种组织总DNA A₂₆₀/A₂₈₀比值依次为1.545、1.553、1.785、1.724、1.464,浓度为1 275 ng/μL、1 825 ng/μL、2 500 ng/μL、1 250 ng/μL、2 050 ng/μL。其中叶片总DNA提取效果最好,A₂₆₀/A₂₈₀比值接近纯DNA(1.8～2.0),总DNA浓度达到2 500 ng/μL。因此,华北耧斗菜叶片更适宜用改良CTAB法提取其总DNA。

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

图2各组织研磨后的颜色与质地

各组织研磨后的表现如图2所示，华北耧斗菜各组织都比较均匀，茎类较难研磨，存在少许纤维素，其中可能含有较多分化完全的导管与筛管细胞；根类组织变褐现象严重，可能含有较多的多酚，易氧化变黑；花类组织含有较多的水分，研磨过程中色泽淡化，且色素被β-巯基乙醇还原为黄色；叶类组织研磨效果较好....

图3水浴后加入24∶1氯仿/异戊醇的效果

加入24∶1氯仿/异戊醇结果如图3所示，根、茎、叶和种子不易与24∶1氯仿/异戊醇分散，蛋白质层较厚；花类组织材料与有机相分层明显，大部分色素溶于基层有机相，少量色素溶于上清液，多糖、蛋白质含量较少。2.1.3各组织离心分层效果

图4各组织第一次离心结果

离心可使CTAB-蛋白质/多糖络合物加速沉淀，液体明显分为3层，上层为溶解有DNA的高盐缓冲液，中间层为CTAB-蛋白质/多糖的复杂络合物，下层为溶解有色素、酯类、酚类的氯仿/异戊醇。从图4可以看出，根类组织上清液浑浊，有较多的多酚被氧化变为褐色；茎、叶、种子类组织分层明显，上清....

图5各组织总DNA沉淀效果

由于DNA不溶于异丙醇等有机溶剂，通过离心可使其沉淀下来。离心后沉淀如图5，可以看出根的总DNA沉淀最少，且沉淀中有褐色杂质；茎的总DNA沉淀少，颜色半透明偏白；叶和种子的总DNA沉淀适中，颜色白，效果好；花瓣的总DNA沉淀少，为浅黄色，有色素杂质残留。2.2紫外分光光度计结果

本文编号：3969932