整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用

发布时间：2017-10-11 20:30

  本文关键词：整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用

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【摘要】：为了建立一种能同时检测1类整合子、4类超级整合子和1型插入序列共同区的多重PCR检测方法,根据Gen Bank中1类整合子整合酶基因int1、4类超级整合子整合酶基因intSXT和1型插入序列共同区转座酶基因ISCR1的序列,应用Primer Plex 2.61设计3对特异性引物,通过改变引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行了优化。此后,评价了所建立多重PCR体系的特异性和灵敏度,并应用于222株海水养殖源弧菌中3种整合子相关元件的检测。结果显示,设计的3对引物能分别单独且特异性地扩增出569 bp、430 bp和651 bp的目的条带;当int1、intSXT和ISCR13对引物(10 pmol/μL)的体积依次为0.3μL、0.6μL和0.6μL,退火温度为50℃时,多重PCR体系能特异性地扩增出3个条带清晰、区分度良好的目的条带,方法的灵敏度达到0.02 ng/μL弧菌基因组模板DNA;利用所建立的方法对222株临床分离弧菌进行3种整合子元件检测得到的结果与文献报道的单引物检测结果一致。从上述研究结果可以看出,该多重PCR方法能快速准确地检测Int1、SXT和ISCR1,适用于整合子相关元件流行监测及整合子相关的耐药性研究。
【作者单位】： 中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室;上海海洋大学水产与生命学院;
【关键词】： 多重PCR 整合子 SXT ISCR 弧菌
【基金】：上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字〔2014〕第3-4号) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(东海水产研究所L-2015-1602)
【分类号】：R378
【正文快照】： 抗生素的发现和应用拯救了数十亿人的生命,同时也推动了陆生和水生动物养殖业的发展。随着抗菌药物在人类医学临床尤其是在食品动物养殖中的广泛使用,细菌耐药性问题日趋严重。整合子是介导革兰氏阴性菌抗菌药物耐药产生和迅速传播的重要机制之一[1]。它是细菌的一种天然的克

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4 王s，

本文编号：1014592