猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

发布时间：2017-10-12 10:00

  本文关键词：猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

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【摘要】：目的鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定。结果Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量(M_r)为53 000,主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在M_r 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。
【作者单位】： 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【关键词】： 猪带绦虫 Tsserpin B 鉴定 表达 抗原性分析
【基金】：国家自然科学基金(No.31372433)~~
【分类号】：R383.32
【正文快照】： (1 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Key Laboratory of Veterinary Parasitology ofGansu Province,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China;2 Jiangsu Co-innovation Center for Pr

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本文编号：1018053