双抗体夹心ELISA定量检测狂犬病病毒糖蛋白方法的建立及初步应用

发布时间：2017-10-13 07:19

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【摘要】：目的定量检测狂犬病病毒病毒样颗粒糖蛋白含量。方法以狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体作为捕获抗体,狂犬病病毒多克隆抗体作为检测抗体,标准品为以细胞半数感染量(TCID50)准确定量的狂犬病病毒SRV9毒株病毒液,建立检测狂犬病病毒糖蛋白(RABV-GP)含量的双抗体夹心ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、重复性和灵敏度。结果双抗体夹心ELISA定量检测方法最佳工作条件为:狂犬病病毒糖蛋白蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5μg/ml,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;狂犬病病毒多克隆抗体1∶200稀释,37℃孵育1.5h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min。结论该方法可特异性定量检测狂犬病病毒,与犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬传染性肝炎病毒均不发生反应。该方法线性检测范围为1×104~1.0×107 TCID50/ml,平均批内变异系数小于6%,平均批间变异系数小于8%。
【作者单位】： 吉林农业大学研究生学院;军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;长春西诺生物科技有限公司;吉林大学动物医学学院;海城市种畜禽监督管理站;
【关键词】： 狂犬病病毒 双抗体夹心ELISA 糖蛋白 抗原定量检测
【基金】：宠物疫病快速诊断与疫苗研究与示范(201303042) 动物狂犬病快速诊断与有效疫苗研究(201103032)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： ***狂犬病(rabies)是一种由狂犬病毒(rabies virus,RABV)引起的侵害中枢神经系统的人畜共患传染病,致死率极高,全世界每年至少6万人死于该病[1]。大多数狂犬病病例发生于非洲和亚洲,病犬为主要传染源[2-3]。狂犬病潜伏期短者几天,长者达十余年乃至数十年,发病后几乎100%死亡,

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本文编号：1023523