C反应蛋白对3T3-L1脂肪细胞总脂联素和高分子量多聚体脂联素的影响及其调控机制

发布时间：2017-10-18 05:44

  本文关键词：C反应蛋白对3T3-L1脂肪细胞总脂联素和高分子量多聚体脂联素的影响及其调控机制

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【摘要】：目的观察C反应蛋白(CRP)对3T3-L1脂肪细胞总脂联素(Adiponectin)及各聚体表达的影响,并进一步探讨其调控机制。方法1.3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,予CRP重组蛋白干预,分别用Real-time PCR观察总脂联素mRNA变化,Western blot方法明确其对脂联素以及高分子量脂联素蛋白表达的影响。2.细胞免疫荧光方法检测CRP干预后,3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白表达变化。3.Western blot检测CRP刺激后,总脂联素及各聚体(低聚体(low-molecular-weight,LMW)、中聚体(middle-molecular-weight,MMW)、高聚体(high-molecular-weight,HMW))表达变化。Real-time PCR检测脂联素多聚化相关调控基因Erp44、Ero1-α和DsbA-L表达水平。4.3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,分别加入CRP、磷脂酰肌醇3酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)信号通路抑制剂LY294002、蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化抑制剂T3830,real-time PCR、Western blot等方法,检测总脂联素mRNA和蛋白表达水平,Western blot方法检测高分子量多聚体脂联素表达水平。结果1.Real-time PCR及Western blot结果均显示,作用24h后,5μg/m L CRP对总脂联素无明显影响,25μg/mL CRP对总脂联素表达的抑制具有统计学意义,50μg/mL CRP对总脂联素的抑制作用更为明显,呈剂量依赖。50μg/mL CRP干预6h后,总脂联素表达无变化,干预12h对总脂联素产生抑制作用,而24h更明显,呈时间依赖。2.免疫荧光显示,50μg/m L显著抑制3T3-L1脂肪细胞内脂联素表达。3.Western blot结果显示,作用24h后,5μg/mL CRP对高分子量多聚体脂联素无明显影响,25μg/m L CRP显著抑制高分子量多聚体脂联素蛋白表达,50μg/mL CRP的抑制作用更为明显,呈剂量依赖。50μg/mL CRP干预细胞6h后,高分子量多聚体脂联素无明显变化,12h后,高分子量多聚体脂联素蛋白表达显著降低,24h后更明显,呈时间依赖。4.Western blot结果显示,50μg/mL CRP作用24h后,总脂联素表达降低。低聚体无显著变化,中聚体表达降低,高分子量多聚体表达降低且更为明显。HMW/total adiponectin比值降低。Real-time PCR显示,adiponectin多聚化相关基因Erp44表达上升,Ero1-α与DsbA-L表达下降。5.在3T3-L1脂肪细胞中,分别加入PI3K抑制剂LY294002和Akt磷酸化抑制剂T3830,结果显示,均可部分逆转CRP对脂联素的抑制作用。结论1.CRP抑制总脂联素和高分子量脂联素的表达,且呈时间与剂量依赖。2.CRP对高分子量多聚体的抑制作用更为明显,且影响了脂联多聚化相关基因表达水平。3.CRP对脂联素的抑制作用可部分通过PI3K-Akt信号通路进行调控。
【关键词】：C反应蛋白 3T3-L1脂肪细胞 脂联素 高分子量多聚体脂联素 PI3K/Akt信号通路
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R3411
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 绪论13-14
• 第一章 CRP对脂肪细胞中总脂联素表达的影响14-31
• 1.1 引言14
• 1.2 实验材料14-19
• 1.3 实验方法19-25
• 1.4 实验结果25-29
• 1.5 讨论29-30
• 1.6 本章小结30-31
• 第二章 CRP对脂联素各聚体表达及多聚化的影响31-43
• 2.1 引言31-32
• 2.2 实验材料32-36
• 2.3 实验方法36
• 2.4 实验结果36-40
• 2.5 讨论40-42
• 2.6 本章小结42-43
• 第三章 CRP对脂联素表达影响的分子机制初步研究43-53
• 3.1 引言43
• 3.2 实验材料43-45
• 3.3 实验方法45
• 3.4 实验结果45-50
• 3.5 讨论50-52
• 3.6 本章小结52-53
• 第四章 主要结论与展望53-54
• 4.1 主要结论53
• 4.2 展望53-54
• 参考文献54-61
• 综述61-70
• 参考文献66-70
• 致谢70-71
• 在学期间发表的学术论文及其他科研成果71-72

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本文编号：1053276