乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

发布时间：2017-10-19 05:46

  本文关键词：乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

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【摘要】：目的建立乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(AY193712)及PCV2序列(AY181946)设计引物,以提取的PCV1和PCV2基因组DNA为模板,分别经PCR扩增726 bp的PCV1片段和433 bp的PCV2片段,并对PCR反应中的退火温度、引物浓度、Mg2+浓度参数进行优化。将PCR扩增产物分别与p MD18-T载体连接,连接产物转化感受态大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,测序并进行同源性分析。对优化的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测3批乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、4批明胶和10批胰蛋白酶中的PCV1和PCV2。结果确定PCR反应的退火温度为54℃,引物浓度为10μmol/L,Mg2+浓度为10 mmol"L。扩增的目的基因测序结果与Gen Bank中发布的PCV1及PCV2序列的同源性均为100%。建立的PCR方法最低可检出10 pg的目的基因;该方法只对PCV1和PCV2基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、明胶和胰蛋白酶,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了乙型脑炎减毒活疫苗中PCV1和PCV2的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,可用于乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批及两种猪源性原材料的PCV1和PCV2污染检测。
【作者单位】： 成都生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 乙型脑炎减毒活疫苗 猪圆环病毒型 猪圆环病毒型 聚合酶链反应
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的一种人类神经系统疾病,据世界卫生组织(WHO)统计,全球每年至少有30%的乙型脑炎病毒感染者会导致永久性的神经系统后遗症[1]。目前接种乙型脑炎减毒活疫苗在预防控制该疾病的流行中发挥重要作用[2]。猪圆环病毒(porcine circovi

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本文编号：1059389