人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位研究

发布时间：2017-10-20 16:06

  本文关键词：人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位研究

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【摘要】：目的·应用人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端(NT-proBNP)抗原表位,采用大肠杆菌表达系统高效表达具有脑钠肽前体N端抗原表位活性的结构稳定的重组蛋白。方法·将编码脑钠肽前体N端第12~21位和第13~20位氨基酸残基的抗原表位序列分别取代骨架蛋白FN3 FG loop区,并克隆到大肠杆菌表达载体pET28(a)+上,由大肠杆菌BL21(DE3)plySs表达后纯化,检测其抗原活性并进行理化性质分析。结果·成功构建骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体第12~21位和第13~20位氨基酸残基抗原表位的表达载体,获得高效表达骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位的大肠杆菌表达菌株。镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白,经Western blotting与ELISA鉴定具有脑钠肽前体N端抗原免疫活性。通过差式热量扫描法检测显示重组蛋白保持FN3骨架蛋白原有结构稳定性;血浆稳定性检测显示重组蛋白是与抗原蛋白等效的高稳定的抗原蛋白替代物,可明显延长降解周期(血浆半衰期)。结论·成功利用了FN3骨架蛋白展示脑钠肽N端前体,采用大肠杆菌表达系统可以简单、快速、高效制备具有与脑钠肽前体的抗原性相当的脑钠肽前体抗原替代物。
【作者单位】： 大连大学医学院人体解剖学教研室;大连大学医学研究中心;
【关键词】： 骨架蛋白 脑钠肽前体 表位展示
【基金】：国家自然科学基金(31370937)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)是利钠肽家族成员之一,又称B型利钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP),具有利钠排水的作用。在心脏负荷加重时,由心肌细胞分泌的BNP可有效抑制肾素一血管紧张素一酸固酮系统,扩张血管,改善心功能。临宋研究1151表明,BNP是反映心脏功能

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本文编号：1068066