α1-Giardin的原核表达与多克隆抗体制备

发布时间：2017-10-22 01:07

  本文关键词：α1-Giardin的原核表达与多克隆抗体制备

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【摘要】：目的原核表达α1-Giardin并制备兔抗rα1-Giardin多克隆抗体。方法以蓝氏贾第鞭毛虫DNA为模板,PCR扩增α1-giardin编码基因片段,经双酶切后连入原核表达载体pET-41a(+),构建重组表达载体pET-41a(+)-α1-giardin,热激法转化大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后收集菌体并裂解,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,采用His-tag亲和层析柱纯化融合蛋白。将α1-Giardin蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫新西兰白兔,隔周以同样剂量蛋白加等体积弗氏不完全佐剂加强免疫2次。末次免疫后一周颈动脉取血,制备多抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价。结果成功构建原核表达载体pET-41a(+)-α1-giardin,转化大肠埃希菌后经IPTG诱导表达分子质量单位为34.8ku的可溶性蛋白;经His-tag亲和层析柱纯化获得高纯度的重组α1-giardin蛋白,制备的免疫兔抗血清ELISA滴度为1∶51 200。结论成功克隆、表达并纯化了贾第虫α1-giardin蛋白,制备了高滴度的抗α1-giardin多克隆兔血清,为以α1-Giardin为抗原的疫苗研究奠定了基础。
【作者单位】： 吉林医药学院;
【关键词】： 蓝氏贾第鞭毛虫 α-贾第素 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81301450,31572262) 吉林省科技厅国际合作项目(No.20160414050GH) 吉林市杰出青年基金项目(No.201464037)
【分类号】：R382.2;R3416
【正文快照】： ***蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)简称贾第虫,主要寄生于人和多种哺乳动物的小肠,可导致腹泻、营养吸收不良综合征及儿童生长障碍[1-5]。贾第虫细胞骨架的特有成分为贾第素,与贾第虫的致病性密切相关。贾第素分为4大类,即α、β、γ和δ-贾第素(giardin),α-giardin是最大

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本文编号：1076044