靶向调控大鼠海马CNN3基因表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-10-24 05:03

  本文关键词：靶向调控大鼠海马CNN3基因表达载体的构建及鉴定

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【摘要】：目的建立可调控大鼠局部脑区CNN3基因表达的技术,为进一步研究CNN3基因参与脑内病理生理过程奠定基础。方法设计并合成针对CNN3基因的全长编码序列c DNA和3条sh RNA干扰靶点序列,利用基因工程技术构建CNN3-OE和3个CNN3-sh RNA慢病毒载体,在立体定位仪引导下注入大鼠海马,采用蛋白免疫印迹技术筛选CNN3基因的最佳沉默序列,并找出重组表达和沉默慢病毒载体调控海马CNN3基因的变化规律。结果CNN3-OE和3个CNN3-sh RNA慢病毒干扰载体均构建成功,转染后8周内对海马CNN3基因水平均有一定调控作用,其中CNN3-sh RNA2载体组在转染后的8周内海马CNN3基因编码蛋白calponin-3水平均显著性下调,最高抑制率为73.26%;CNN3-OE慢病毒载体组中海马calponin-3蛋白水平具有统计学意义的升高仅在转染后第14天,上调率为93.88%。结论通过定位注射CNN3-OE和CNN3-sh RNA慢病毒载体可在体调控局部脑区CNN3基因表达,为后续的机制研究和开拓疾病防治新途径奠定基础。
【作者单位】： 昆明医科大学第一附属医院神经内科;昆明医科大学第一附属医院检验科;昆明医科大学生物医学工程研究中心;
【关键词】： CNN 基因 沉默 重组 慢病毒载体
【基金】：国家自然科学基金地区基金(81260199) 云南省科技厅-昆明医科大学联合基金(2012FB030) 云南省卫生科技计划项目(2012WS0002)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 1995年Maguchi等[1]首次分离出CNN3基因,其编码的calponin-3蛋白可与肌动蛋白、钙调蛋白、肌钙蛋白和原肌球蛋白结合,不仅分布在肝、肺、肾、肌肉、皮肤、卵巢[2-5],还是calponin家族中唯一分布在中枢神经系统的一个亚型,在大脑、小脑和脑血管均有表达[6-8],尤其是近年来研究

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1 罗望;张泓;许淼;顾林;孙倍成;;慢病毒——基因转移的潜在新载体[J];江苏药学与临床研究;2006年06期

2 张惊宇;李金星;孙永奇;赵虹;杨子超;;大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年07期

3 任振华;王淑艳;张颖;邹春林;张愚;;慢病毒载体感染成年食蟹猴骨髓间充质干细胞[J];生物工程学报;2010年06期

4 邓昭玲;王彦;杜利清;刘强;赵辉;陈乃耀;;SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测[J];中国组织工程研究;2012年28期

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本文编号：1087146