活血益气方及其拆方对急性心肌梗死模型大鼠miR-126、Spredl表达及血管新生的影响

发布时间：2017-10-27 12:36

  本文关键词：活血益气方及其拆方对急性心肌梗死模型大鼠miR-126、Spredl表达及血管新生的影响

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【摘要】：治疗性血管新生,又称“药物促进心脏自身搭桥”,可以有效建立侧枝循环,改善患者的缺血缺氧状态,减少心肌梗死、预防或逆转心室重构,在改善患者心功能及预后等方面,发挥着重要作用,为多种缺血性疾病的治疗提供了新的思路和广阔的应用前景。 microRNA作为基因调控的分子“开关”,在血管生成过程起着重要的调节作用,可能调控了重要的血管生成因子的表达水平。miR-126是心血管疾病中最容易表达的miRNA之一,也是血管内皮上的特异性的mi RNA,在缺血性心脏病治疗性血管生成中具有关键性作用,开展以miR-126为治疗性血管生成作用靶点的研究具有重要意义。目的：以血管内皮特异性miR-126为切入点,观察具有促进血管新生作用的活血益气方对miR-126及血管新生负性调节因子Spredl的影响,进一步阐明miR-126、 Spred1与血管新生之间的关系,及活血益气方通过miR-126、Spredl介导缺血性心脏病治疗性血管生成的作用机制和配伍规律。方法：健康雄性SD大鼠行左冠状动脉前降支结扎术制备急性心肌梗死模型,随机分为模型组、活血益气方组、益气方组、活血方组。假手术组只穿线不结扎。连续给予相应药物4周后,处死大鼠,取梗死边缘区心肌组织进行指标检测。采用免疫组织化学法检测成熟血管标记物α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)及内皮特异性标记物CD31,并测量梗死边缘区微血管平均直径来观察各组的血管新生情况；采用实时荧光定量PCR法,观察miR-126,Spred1、VEGF的mRNA的表达情况；采用Vestern Blot法观察Spred1、VEGF蛋白的表达情况。结果：1.以α-SMA检测梗死边缘区心肌组织微血管密度(MVD),模型组MVD高于假手术组,两者比较具有统计学差异(P0.01);活血益气方组、益气方组、活血方组MVD高于模型组,分别与之比较,仅活血益气方组、活血方组具有统计学差异(P0.01,P0.05);益气方组、活血方组MVD均低于活血益气方组,分别与之比较,均具有统计学差异(1, P0.05)。2.以CD31检测梗死边缘区心肌组织MVD,模型组MVD高于假手术组,两者比较具有统计学差异(P0.01)；活血益气方组、益气方组、活血方组MVD高于模型组,与之比较,均具有统计学差异(P0.01)；益气方组、活血方组MVD均低于活血益气方组,与之比较,未见统计学差异(P0.05)。3.模型组梗死边缘区心肌组织微血管平均直径(MMVD)显著小于假手术组,差异具有统计学意义(P0.01)；活血益气方组、益气方组、活血方组MMVD大于模型组,仅活血益气方组与之比较具有统计学差异(P0.01)；益气方组、活血方组MMVD小于活血益气方组,分别与之比较,均具有统计学差异(P0.01)。4.模型组梗死边缘区心肌组织、/EGF mRNA表达高于假手术组,两者比较未见统计学差异(P0.05)；活血益气方组、益气方组、活血方组VEGF mRNA表达高于模型组,仅活血益气方组、活血方组与之比较具有统计学差异(P0.01)；益气方组、活血方组、/EGF mRNA表达均低于活血益气方组,仅益气组与之比较具有统计学差异(P0.05)。5.模型组梗死边缘区心肌组织VEGF蛋白表达高于假手术组,两者比较未见统计学差异(P0.05)；活血益气方组、益气方组VEGF蛋白表达虽高于模型组,但与之比较未见统计学差异(P0.05)；益气方组、活血方组VEGF蛋白表达低于活血益气方组,与之比较,均未见统计学差异(P0.05)。6.模型组梗死边缘区心肌组织Spredl mRNA表达高于假手术组,两者比较具有统计学差异(P0.05)；活血益气方组、益气方组、活血方组Spredl mRNA表达高于模型组,与之比较,均具有统计学差异(P0.01或P0.05)；益气方组、活血方组Spredl mRNA表达均高于活血益气方组,仅活血方组与之比较具有统计学差异(P0.01)。7.模型组梗死边缘区心肌组织Spred1表达高于假手术组,两者比较未见统计学差异(P0.05)；活血益气方组、益气方组、活血方组Spred1表达均低于模型组,与之比较,具有统计学差异(P0.05)；益气方组Spredl表达低于活血益气方组,活血方组Spred1表达高于活血益气方组,分别与之比较,均未见统计学差异(P0.05)。8.模型组梗死边缘区心肌组织miR-126表达低于假手术组,两者比较具有统计学差异(P0.01)：活血益气方组、益气方组、活血方组miR-126表达低于模型组,分别与之比较,具有统计学差异(P0.01或P0.05)；益气方组、活血方组miR-126表达均高于活血益气方组,仅益气方组与之比较具有统计学差异(P0.01)。结论：活血益气方及其拆方具有不同程度促进心肌梗死模型大鼠梗死边缘区血管新生的作用,以活血益气方作用最为显著,益气方、活血方在其中起协同作用。其作用机制可能与下调miR-126的表达水平,减轻miR-126对VEGF的抑制作用,直接或间接上调VEGF mRNA的表达,进而促进VEGF的表达；下调Spred1而上调其mRNA的表达有关。Spred1 mRNA上调情况下,Spred1表达降低,提示Spred1 mRNA可能存在其它的转录后调节因子,其机体作用机制尚需进一步研究。
【关键词】：活血益气方 miR-126 Spred1 VEGF 心肌梗死 血管新生
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文缩略词11-12
• 第一部分 文献综述12-23
• 一、miRNA与缺血性心脏病血管新生12-18
• 1 调控miRNA以治疗缺血性心脏病的策略概述12-13
• 2 缺血性心脏病差异表达的miRNA13
• 3 缺血性心脏病血管新生相关microRNAs的作用及机制13-17
• 4 应用与展望17-18
• 参考文献18-23
• 第二部分 理论研究23-33
• 一、冠心病基本病机探讨23-29
• 1 结合古代医籍及现代医学认识冠心病23-27
• 2 气虚血瘀符合基本病机的特点27-29
• 3 结论29
• 参考文献29-33
• 第三部分 实验研究33-79
• 前言33-35
• 一、大鼠急性心肌梗死动物模型的复制35-41
• 1 材料与方法35-36
• 2 结果36-37
• 3 讨论37-38
• 参考文献38-41
• 二、活血益气方及其拆方对急性心梗模型大鼠血管新生的影响41-53
• 1 材料与方法41-45
• 2 结果45-50
• 3 讨论50-51
• 参考文献51-53
• 三、活血益气方及其拆方对心梗模型大鼠梗死边缘区VEGF及其mRNA表达的影响53-63
• 1 材料与方法53-58
• 2 结果58-60
• 3 讨论60-62
• 参考文献62-63
• 四、活血益气方及其拆方对心梗模型大鼠梗死边缘区Spred1及其mRNA表达的影响63-73
• 1 材料与方法63-68
• 2 结果68-70
• 3 讨论70-71
• 参考文献71-73
• 五、活血益气方及其拆方对心梗模型大鼠梗死边缘区miR-126表达的影响73-79
• 1 材料与方法73-75
• 2 结果75-76
• 3 讨论76-77
• 参考文献77-79
• 结语79-80
• 致谢80-81
• 在学期间主要研究成果81-82
• 个人简历82

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本文编号：1103537