杆状病毒-昆虫细胞系统表达的戊型肝炎病毒衣壳蛋白p495的纯化、结构解析以及免疫原性分析

发布时间：2017-10-29 09:04

  本文关键词：杆状病毒-昆虫细胞系统表达的戊型肝炎病毒衣壳蛋白p495的纯化、结构解析以及免疫原性分析

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【摘要】：本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放读码框2(ORF2)的aa112-606片段构建杆状病毒,感染昆虫细胞进行重组蛋白的表达,经过PEG沉淀和阴离子交换层析的纯化,获得纯度为95%以上的p495蛋白,每升细胞培养液最终获得15mg的目的蛋白。经ELISA、分析超离、分子排阻色谱和电镜负染等分析显示p495蛋白具有良好的抗原性且呈现为均一的病毒样颗粒(VLP),沉降系数为51.3S,颗粒直径约20nm。冷冻电镜三维结构解析获得分辨率为3.8姒的三维结构,揭示p495形成了T=1的等二十面体结构,与已报道的晶体结构相一致。小鼠免疫实验表明p495蛋白与益可宁中p239抗原的免疫原性相当。本研究为进一步开展HEV的受体鉴定、表位结构研究以及疫苗改进等奠定良好的基础。
【作者单位】： 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院;厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院;
【关键词】： 戊型肝炎病毒 病毒样颗粒 真核表达系统 HEVP蛋白冷冻电镜三维重构 免疫应答
【基金】：国家自然科学基金(项目号:81571996)
【分类号】：R392
【正文快照】： 戊肝病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一种正链单股无包膜的RNA病毒,其基因组约为7.2kb。通常地,HEV是以病毒颗粒的形态存在,直径约27~34nm,由单一衣壳蛋白组成正二十面体结构。至今,重症戊型肝炎仍是一项世界范围内较为严重的公共卫生问题,据估计全世界约1/3的人口感染戊肝病毒

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本文编号：1112280