miR-93真核表达载体的构建及其表达验证

发布时间：2017-10-29 10:04

  本文关键词：miR-93真核表达载体的构建及其表达验证

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【摘要】：目的构建人miR-93真核表达载体,并验证其表达效果,为进一步研究miR-93的生物学功能提供有利工具。方法用PCR方法从293T细胞基因组DNA中扩增miR-93前体序列,引物引入酶切位点和保护碱基,产物用限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切后插入pEZX-MR04表达载体中,构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93。构建好的载体用双酶切、PCR和测序鉴定,同时转染293T细胞,用Real time PCR检测重组pEZX-MR04-miR-93质粒的miR-93表达效率。结果成功构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93,重组pEZX-MR04-miR-93质粒转染293T细胞后miR-93表达上升约21倍。结论构建的miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93可显著上调细胞中miR-93水平,为进一步研究miR-93在泌尿系肿瘤中的生物学功能提供可靠工具,奠定了坚实的实验基础。
【作者单位】： 西安交通大学第一附属医院泌尿外科;
【关键词】： miR- 表达载体 pEZX-MR T
【基金】：国家自然科学基金(No.81572516) 陕西省国际科技合作与交流计划项目(No.2016KW-021)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miR)是一类广泛存在于生物体内的长度约为19~25个碱基的单链非编码RNA,自被发现以来,数以千计的microRNA相继被报道并研究。越来越多的研究证实,microRNA可广泛参与生物体的各项生物学行为,包括肿瘤的进展、生物体的发育、心脑血管疾病、骨关节炎等。人miR-9

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本文编号：1112484