人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

发布时间：2017-11-07 08:31

  本文关键词：人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

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【摘要】：目的构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2(human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白。方法采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性。结果重组质粒经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1%,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L。结论成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高。
【作者单位】： 复旦大学生命科学学院生物化学系;云南天然产物与生物制药协同创新中心;
【基金】：国家自然科学基金(81373396,81573310) 高等学校博士学科点专项科研基金(20130071110037)~~
【分类号】：R3411
【正文快照】： 吲哚胺2,3-双加氧酶-2(indoleamine 2,3-dioxygenase-2,IDO2),是继吲哚胺2,3-双加氧酶-1(indoleamine 2,3-dioxygenase-1,IDO1)、色氨酸双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO)之后,第3个被发现能够催化色氨酸沿着犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)代谢的限速酶,可催化

【相似文献】

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1 张炜,殷长传,郑佐华,蔡在龙,夏晴,毛裕民;耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的高表达、纯化及性质[J];生物化学与生物物理学报;1998年06期

2 ;[J];;年期

，

本文编号：1151645