超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白

发布时间：2017-11-14 06:18

  本文关键词：超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白

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【摘要】：目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯化,在10mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情况下,PreScission蛋白酶切除GST标签,凝胶电泳鉴定CT3蛋白,检测蛋白纯度和相对分子质量。结果 SDSPAGE结果显示,超声破碎法可以纯化得到GST-CT3融合蛋白,且单纯应用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段浓度较低,而采用PreS cission蛋白酶联合应用DTT则可以成功提取纯化出浓度较高的CT3蛋白片段。结论超声破碎法联合应用DTT与PreScission蛋白酶能够提取纯化出高浓度和纯度的CT3蛋白片段,为深入研究CT3的生物学功能奠定了基础。
【作者单位】： 中国医科大学药学院药物毒理学教研室;东北大学机械工程与自动化学院环境机械研究所;
【基金】：国家自然科学基金(31400981,31471091) 大学生创新计划项目(2015069,201510159068,201510159047,2015048)
【分类号】：R363
【正文快照】： 钙离子(calcium,Ca2+)参与机体众多的生理生化反应,是维持生命活动的重要阳离子,细胞胞浆内Ca 2+浓度处于持续的高水平状态与许多疾病状态密切相关,例如高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化、心肌肥厚、心律失常、缺血-再灌注损伤等。心 肌细胞L型电压依赖性钙离子通道(L-type vo

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本文编号：1184209