Apak稳定敲除细胞系的建立及其p53活性和凋亡水平的变化

发布时间：2017-11-14 22:16

  本文关键词：Apak稳定敲除细胞系的建立及其p53活性和凋亡水平的变化

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【摘要】：目的利用CRISPR/Cas9慢病毒系统在人结肠癌细胞(HCT116细胞)中建立稳定及永久性Apak敲除细胞系,检测Apak敲除后细胞部分生物学活性、p53活性和凋亡水平的变化。方法构建lenti CRISPR v2-sgRNA Apak敲除质粒,进行慢病毒包装,感染HCT116细胞,嘌罗霉素筛选出阳性克隆。通过蛋白质免疫印迹检测Apak蛋白水平,筛选得到Apak稳定敲除细胞系。分别通过报告基因实验、流式细胞术和克隆形成实验测定Apak稳定敲除细胞系中p53活性、细胞凋亡率和克隆形成能力。结果通过测序证明lenti CRISPR v2-sgRNA Apak敲除质粒正确,蛋白质免疫印迹证实Apak敲除细胞系中Apak表达缺失。在Apak敲除细胞系中p53的转录活性增强,Apak敲除细胞凋亡增加、克隆形成能力降低。结论获得Apak稳定敲除细胞系,便于后期Apak功能的研究。
【作者单位】： 广东医学院;军事医学科院放射与辐射医学研究所 蛋白质组学国家重点实验室 国家蛋白科学研究中心(北京);蛋白质药物国家工程研究心;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31540072,31270799) 国家科技合作专项资助项目(2014DFB30020) 北京市自然科学基金资助项目(5142019) 蛋白质组学国家重点实验室开放课题(SKLP-O201414)
【分类号】：R329.2;Q78
【正文快照】： 在细胞学和分子生物学领域,对基因功能的研究主要是如何从分子机制上反映基因对表型的影响。前期主要通过在生物体中进行基因沉默或过量表达来研究基因变化对表型的影响,但都较复杂且耗时。在过去的几十年中出现了一种新的方法——基因组编辑技术,广泛应用于基因功能的研究,其

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本文编号：1187231