小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-11-15 18:30

  本文关键词：小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

  更多相关文章： 小反刍兽疫病毒 H蛋白 原核表达 多克隆抗体

【摘要】：目的对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)主要抗原表位区进行克隆及原核表达,并制备鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的PPRV弱毒疫苗株H基因序列设计引物,RT-PCR扩增其主要抗原表位区域(去掉信号肽及跨膜区);将扩增产物克隆至表达载体p ET-30a(+)后,转化E.coli Transetta(DE3),经IPTG 37℃诱导表达目的蛋白;表达的目的蛋白经带His标签的镍离子蛋白纯化柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定;将纯化的H蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫昆明鼠,3次免疫2周后采血,分离血清,制备鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗体,采用间接免疫荧光试验进行鉴定。结果质粒p ET-30a(+)-H经双酶切鉴定证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约60 000,能同时被抗His标签抗体和PPRV阳性绵羊血清识别,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的48%,纯度可达90%以上;制备的多克隆抗体能够识别PPRV全病毒抗原以及杆状病毒表达的重组PPRV H蛋白。结论成功构建了质粒p ET-30a(+)-H,并表达了PPRV H蛋白,制备的鼠源多克隆抗体为建立针对PPRV H蛋白的ELISA抗体检测方法及研制新型亚单位疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;吉林大学动物医学学院;吉林农业大学动物科技学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：国家科技支撑计划(2015BAD12B04)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由PPR病毒(PPR virus,PPRV)引起的急性或亚急性传染病,主要危害山羊、绵羊、羚羊等小反刍动物,而绵羊与山羊较易感,其中山羊高度易感,严重时发病率可达100%[1-2]。世界动物卫生组织(Office Inte-rnational Des Epizooties,OIE)将

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 张忠湛;高玉伟;夏咸柱;侯小强;黄耕;;小反刍兽疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立[J];中国病原生物学杂志;2009年04期

2 包静月;赵文姬;李林;王志亮;吴国珍;吴晓东;刘春菊;王清华;王君玮;刘雨田;李金明;王英丽;;中国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gei/07-30磷蛋白基因的分子特征及其编码蛋白特性分析[J];病毒学报;2011年01期

3 包静月;王志亮;李林;赵文姬;索朗次仁;李金明;王英丽;吴晓东;刘春菊;刘雨田;于小静;杨咏梅;;我国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30核衣壳蛋白基因和基因组启动子区的分子特征分析[J];病毒学报;2008年06期

4 包静月;赵文姬;王志亮;李林;吴国珍;吴晓东;刘春菊;王君玮;刘雨田;李金明;王英丽;;中国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30基质蛋白基因和融合蛋白基因的分子特征分析[J];病毒学报;2010年04期

5 阮洋;秦峻岭;高玉伟;黄海楠;孙玮;杨松涛;王承宇;王铁成;黄耕;王志亮;夏咸柱;;小反刍兽疫病毒H基因的真核表达[J];中国病原生物学杂志;2011年02期

6 孟庆玲;乔军;倪伟;才学鹏;骆学农;张娜;;小反刍兽疫病毒H和N蛋白的表达及抗体制备[J];中国病原生物学杂志;2010年09期

7 田康乐;李刚;邱文英;程朝飞;;小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备[J];中国生物制品学杂志;2012年09期

8 刘文华;包静月;吴晓东;王志亮;;中国小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07全基因组序列测定与分析[J];病毒学报;2010年04期

9 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 王玉红;支海兵;黄炯;;小反刍兽疫病毒在两种Vero细胞中生长特性的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

2 李伟;李刚;范晓娟;张坤;贾风琴;史利军;Hermann Unger;;小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 张国瑞;小反刍兽疫病毒西藏株N基因人工合成、表达及检测方法建立的研究[D];南京农业大学;2010年

2 翟军军;小反刍兽疫病毒全长cDNA的构建及DNA疫苗的免疫学研究[D];中国农业科学院;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 贾凤芹;小反刍兽疫病毒核衣壳（N）蛋白的原核表达[D];中国农业科学院;2008年

2 张忠湛;小反刍兽疫病毒等温扩增快速检测方法的建立[D];吉林大学;2009年

3 杨帆;小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株F基因的克隆、表达及应用研究[D];新疆农业大学;2009年

4 田康乐;小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆表达及单克隆抗体的制备[D];中国农业科学院;2012年

5 刘霞;农杆菌介导小反刍兽疫病毒H、F基因转化苜蓿的初步研究[D];青岛农业大学;2010年

6 赵文姬;小反刍兽疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及F基因的分子特性研究[D];扬州大学;2009年

7 惠凯;小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达与鉴定[D];福建农林大学;2009年

8 殷倩倩;N蛋白羧基端融合外源表位的小反刍兽疫病毒的构建和研究[D];中国农业科学院;2013年

9 邵长春;小反刍兽疫病毒H基因与IFN-γ基因共表达质粒的构建[D];甘肃农业大学;2009年

10 龙云凤;小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备及C-ELISA抗体检测试剂盒的研制[D];昆明理工大学;2012年

，

本文编号：1190799