B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探

发布时间：2017-11-17 21:05

  本文关键词：B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探

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【摘要】：[目的]初步探讨和评价NMB0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为研制高效B群流脑疫苗提供可靠实验依据。[方法]1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/NMB0315进行鉴定后,大量制备并纯化;肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性IgG、生殖道黏膜分泌物中特异性s IgA抗体水平及免疫小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4含量,CCK8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数(SI);2.对本课题组保存的含原核重组质粒pET-30a/NMB0315的E.coli BL21诱导表达重组蛋白;腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,分析其诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平。3.大量制备NMB0315核酸疫苗和重组蛋白疫苗,采用核酸初免-蛋白加强(DNA prime-protein boost)方法,联合免疫雌性BALB/c小鼠,测定特异性体液/细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察联合免疫对感染B群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。[结果]1.NMB0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠血清特异性Ig G水平及生殖道黏膜sIg A水平随免疫时间呈上升趋势,免疫后第八周抗体效价分别为1:45,000和1:30,000,明显高于对照组PBS、pcDNA3.1(+)、CpG(P0.01);小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数SI(2.112±0.342)、细胞因子IFN-γ(142.31±19.45 pg/mL)及IL-4(178.04±18.38 pg/mL)水平均明显高于对照组pbs、pcdna3.1(+)、cpg(p0.01)。2.nmb0315蛋白疫苗诱导小鼠产生了高水平的体液免疫应答,特异性igg水平随免疫时间呈升高趋势,第8周效价达1:180,000;siga水平也呈升高趋势,第8周效价为1:40,000;免疫第八周与体液免疫有关的细胞因子il-4含量为248.47±23.37pg/ml,与细胞免疫有关的ifn-γ含量为198.12±20.02pg/ml,小鼠脾细胞刺激指数si为1.631±0.062,上述免疫指标均明显高于pbs和fa对照组(p0.01)。3.核酸初免-蛋白加强的联合免疫诱导的血清特异性igg,igg1,igg2a,igg2b和igg3水平及生殖道灌洗液中特异性siga水平在第八周达到峰值,抗体效价分别为1:150,000、1:70,000、1:50,000、1:22,000、1:45,000、1:30,000,脾淋巴细胞诱生的il-4含量为219.58±20.01pg/ml,上述与体液免疫相关指标均较单一重组蛋白疫苗组低(p0.05);小鼠脾淋巴细胞刺激指数(si:2.185±0.086)及ifn-γ(226.60±22.76pg/ml)这些与细胞免疫有关的指标均明显高于重组蛋白疫苗组(p0.05);核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组免疫血清在补体介导下的体外杀菌效价分别为1:64、1:128和1:128,72小时内对实验小鼠的免疫保护率分别为70%、95%和80%。4.免疫2、4、6、8w时,核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组igg2a/igg1比值均小于1。[结论]1.nmb0315疫苗诱导体液免疫(包括黏膜免疫)的效果为:重组蛋白疫苗组联合免疫疫苗组核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果为:联合免疫疫苗组核酸疫苗组重组蛋白疫苗组;2.nmb0315疫苗72小时内对实验小鼠的免疫保护效果为:重组蛋白疫苗组联合免疫疫苗组核酸疫苗组。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392

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本文编号：1197342