华支睾吸虫Rab2基因的克隆表达及生物学特性分析

发布时间：2017-11-18 05:22

  本文关键词：华支睾吸虫Rab2基因的克隆表达及生物学特性分析

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【摘要】：目的获得原核表达的华支睾吸虫Rab2蛋白,并探索其生物学特性。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得CsRab2的全长cDNA,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用Vector NTI程序对来自于Gen Bank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;Swiss-model预测其三维立体结构,原核表达重组融合蛋白CsRab2,采用Western blot鉴定重组蛋白CsRab2,采用q RT-PCR测定CsRab2基因在不同发育阶段的表达水平。结果 CsRab2全长基因的ORF包含588个碱基,编码195个氨基酸。Prot Param预测该编码蛋白的理论分子量和等电点分别是22.29×103 Mr和5.87。不含有信号肽,也未发现线粒体等亚细胞定位序列,三维预测结果显示,Rab2同Rab家族的其他蛋白类似:由保守的G结构域和长度、序列上高度可变的N端和C端形成。将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色观察该目的蛋白分子量约28×103 Mr。经过亲和层析方法纯化获得的rCsRab2,可被His tag小鼠单克隆抗体识别。CsRab2在华支睾吸虫各生活史阶段均有表达,且在囊蚴和尾蚴阶段表达较高。结论 CsRab2属于保守蛋白,其生物信息学分析符合Rab家族蛋白的共有特性,在囊蚴和尾蚴阶段表达较高,但CsRab2在细胞内确切的定位信息和功能仍有待进一步研究。
【作者单位】： 广东食品药品职业学院;中山大学中山医学院;
【基金】：广东食品药品职业学院自然科学研究项目(2014YZ009)
【分类号】：R383.2
【正文快照】： Rab蛋白家族是一类Ras相关的GTP结合蛋白,Rab蛋白和下游效应蛋白定位在细胞内不同的细胞器,在细胞内囊泡的形成、囊泡之间的转运以及囊泡与细胞膜的粘附、锚定和融合等过程中发挥重要的作用[1]。Rab家族蛋白成员之一—Rab2蛋白的功能被逐步发现:在线虫的神经细胞中Rab2蛋白参

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本文编号：1198686