小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达

发布时间：2017-11-25 03:00

  本文关键词：小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达

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【摘要】：目的构建真核酵母表达载体pPIC9K与小鼠IL-35基因的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3'端引入His标签,构建重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,经SalⅠ线性化重组质粒后,用电穿孔方法将该基因转染毕赤酵母细胞内。经G418梯度筛选高拷贝转化子,筛选Mut+表型后经PCR进一步鉴定IL-35基因与酵母染色体是否整合。小量诱导表达筛选出高表达菌株,大量甲醇诱导表达,以SDS-PAGE及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达。结果小鼠IL-35基因真核酵母表达载体pPIC9K-mIL-35-His构建成功,并且在GS115中通过甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析,可见相对分子质量约为65 000的目的蛋白。结论实验所构建的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His可在毕赤酵母GS115中正确的表达小鼠IL-35基因。
【作者单位】： 潍坊医学院免疫学教研室;潍坊市第二人民医院检验科;
【基金】：山东省自然科学基金(ZR2014HL058) 山东省医药卫生科技发展计划项目(2014WS0462)
【分类号】：R392
【正文快照】： 白介素-35(Interleukin-35,IL-35)是新发现的抗炎性和抑制性细胞因子,可以使调解性T细胞(简称Treg)增殖及抑制效应性T细胞(简称Teff)的增殖,并且可能诱导自体调节性B细胞(简称Breg)来治疗人类自身免疫性疾病和炎症性疾病[1]。IL-35可能成为类风湿性关节炎[2]、过敏性疾病[3-4]，

本文编号：1224504