嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达

发布时间：2017-12-03 05:09

  本文关键词：嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达

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【摘要】：[目的]构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)串联多中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。[方法]将HCV基因中高度保守且具有广谱交叉中和活性的三个表位和一个HVR1模拟表位串连。串联表位嵌合于HBV S基因的氨基端胞外区,形成嵌合基因MEpS;将基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组质粒pCI-MEpS。将质粒转染至293T细胞中,间接免疫荧光及Western Blot检测嵌合基因的表达情况。[结果]重组质粒经双酶切证实构建正确;pCI-MEpS转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western Blot显示pCI-MEpS在相对分子量约38 kDa处可见蛋白条带。[结论]构建了HBV S抗原嵌合HCV串联多中和抗原表位的重组质粒,成功在293T细胞中表达,为制备嵌合HCV串联多中和抗原表位的HBV S抗原VLPs,研究嵌合VLPs免疫动物后产生的中和抗体的保护作用奠定了实验基础。
【作者单位】： 第四军医大学唐都医院临床实验与检验科;第四军医大学基础部微生物学教研室;西安交通大学第一附属医院转化医学中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(“HCV中和抗原表位嵌合病毒样颗粒诱导的中和抗体应答研究”,No.81072500;“乙肝S抗原为载体的HCV嵌合病毒样颗粒预防疫苗的初步实验研究”,No.31370924)资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 丙型肝炎病毒引起的肝炎呈世界性分布,感染后慢性化率高,全球目前大约有1.3~1.7亿的慢性感染者[1]。丙型肝炎病毒感染慢性化导致肝脏炎症坏死、肝纤维化甚至肝硬化和肝癌,持续性感染最终发展为肝硬化/肝癌的机率高达3.5%~20%[2]。HCV基因组高度变异,免疫逃避方式多样,而且由于

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本文编号：1247529