转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控

发布时间：2017-12-06 07:21

  本文关键词：转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控

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【摘要】：目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司;
【分类号】：R392;Q813.11
【正文快照】： 现行人用病毒性疫苗多数是通过细胞培养方法制备。MDCK细胞是培养和分离病毒的哺乳动物细胞系之一,具有易培养,增殖快,对病毒易感等特点。但贴壁培养限制了疫苗的产量,由贴壁细胞转换成悬浮生长可简化生产过程,将贴壁细胞进行悬浮驯化培养成为疫苗生产的需求。siat7e基因编码

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本文编号：1257802