E75、R78和D82是影响大肠埃希氏菌FtsZ自身组装及其与MreB相互作用的重要氨基酸

发布时间：2017-12-08 16:01

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【摘要】：【目的】探索大肠埃希氏菌Escherichia coli FtsZ突变体FtsZ~(E75A)、FtsZ~(R78G)和FtsZ~(D82A)对FtsZ自身组装和FtsZ-MreB相互作用的影响。【方法】利用常规分子克隆和定点突变技术,构建FtsZ及其突变体表达载体,亲和纯化得到相应的目标蛋白;通过同源重组构建QN6(ftsZ::yfp-cat)、QN7(ftsZ~(E75A)::yfp-cat)、QN8(ftsZ~(R78G)::yfp-cat)和QN9(ftsZ~(D82A)::yfp-cat)菌株;利用活细胞成像技术观察FtsZ及其突变体的胞内定位模式;免疫沉淀和细菌双杂交实验检测FtsZ/FtsZ*-FtsZ*或FtsZ/FtsZ*-MreB间的相互作用;光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响。【结果】FtsZ~(E75A)、FtsZ~(R78G)和FtsZ~(D82A)突变体的功能活性降低、各突变体在E.coli内不能正确的定位和形成功能性Z环;FtsZ/FtsZ*-FtsZ*单体间的相互作用减弱或消失,FtsZ*-MreB相互作用破坏;FtsZ突变体体外聚合效率降低。【结论】FtsZ E75、R78和D82是影响FtsZ正确组装和功能及FtsZ-MreB相互作用的重要氨基酸。
【作者单位】： 河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室;西北农林科技大学林学系;
【基金】：国家自然科学基金(81372147) 河南省教育厅自然科学研究项目(2010B320001) 河南大学省部共建项目(SBGJ090713)~~
【分类号】：R378
【正文快照】： 细菌细胞的分裂和特定形态的维持受多种蛋)相互作用形成束状聚合物,最后在菌体中部形成白的调节,其中微管蛋白类似物Fts Z和肌动蛋白Z环。Z环的稳定需要Fts A、Zip A、Zap A和类似物Mre B起核心作用[1 2],但具体的机制目前未Zap B等多种蛋白的参与,其最终起骨架作用,通完全清

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本文编号：1266953