荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1

发布时间：2017-12-10 01:23

  本文关键词：荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1

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【摘要】：目的验证miR-142-5p的靶基因——自噬相关基因Becn1。方法生物信息学预测miR-142-5p与Becn1的结合位点,构建含有结合位点的Becn1基因3'UTR野生型和突变型质粒,将重组质粒与miR-142-5p-mimics或miR-NC共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果 miR-142-5p与Becn1的3'UTR存在一个结合位点(123~129);成功构建野生型重组质粒p GL3-Becn1-3'UTR和靶位点含3个碱基突变的重组质粒Mut-3'UTR;与共转染p GL3-Becn1-3'UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Becn1-3'UTR和miR-142-5p-mimics组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%(P0.01);而与对照组相比,共转染Mut-3'UTR和miR-142-5p-mimics组的荧光素酶活性下降不明显(P0.05)。结论初步验证自噬相关基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。
【作者单位】： 广东医学院衰老研究所;广东医学院医学检验学院;广东省医学分子诊断重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81170327) 广东省医学科研基金(No.A2014470) 东莞市科技计划项目与医疗卫生一般项目(No.2012108102022,201410515200159) 广东医学院科研基金项目(No.XK1412,ZZDC006,ZZDC009,STIF201102)
【分类号】：R3416
【正文快照】： MicroRNAs(miRNAs)通过识别靶mRNA的3'UTR区,降解靶基因或抑制其翻译,从而抑制蛋白质的合成,达到调控基因表达的目的〔1,2〕。双荧光素酶检测是目前判定miRNA是否与靶基因3'UTR结合的基本实验方法。miR-142前体经加工可产生成熟的两个miRNA,分别为miR-142-5p和miR-142-3p,成熟

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 赵江;董兴有;杨星亮;王亮;李龙坤;周占松;宋波;;人和大鼠膀胱平滑肌细胞存在低水平的自噬[J];第三军医大学学报;2014年13期

2 涂平华;李开庭;陈青;欧云生;白定群;;芦荟大黄素介导的光动力诱导骨肉瘤MG63细胞自噬[J];第二军医大学学报;2014年12期

3 涂s，

本文编号：1272605