新型抗原递送载体:细胞溶素A融合目的蛋白整合的重组外膜囊泡的构建与鉴定

发布时间：2017-12-17 05:14

  本文关键词：新型抗原递送载体:细胞溶素A融合目的蛋白整合的重组外膜囊泡的构建与鉴定

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【摘要】：细菌外膜囊泡(OMVs)是革兰氏阴性菌以出芽方式分泌的一种蛋白脂质体,可通过基因工程改造成为外源大分子抗原蛋白的载体。成孔蛋白细胞溶素A(Cly A)可作为引导序列将C-端融合的外源蛋白质定位在菌体及其所分泌的OMVs外膜上。利用Cly A融合蛋白重组的OMVs可介导抗原呈递,制备疫苗。为验证这一假说,本研究拟以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为目的蛋白,采用重组技术,构建Cly A-EGFP融合蛋白表达载体,转化E.coli DH5α,获得Cly A-EGFP融合蛋白整合的重组细菌OMVs,探索Cly A/EGFP融合蛋白整合的OMVs作为一种制备新型疫苗载体的可行性。重组OMVs分别经蛋白酶K和/或EDTA处理后,蛋白质印迹分析显示,Cly A-EGFP融合蛋白有效地整合在重组的OMVs中,且EGFP呈现于表面。重组OMVs与小鼠巨噬细胞Raw264.7共同孵育后,以EGFP作为标记,荧光显微镜观察显示,OMVs可被巨噬细胞吞噬、摄取。进而,荧光显微镜及流式细胞术分析证明,重组的OMVs可被骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)有效摄取,并促进BMDCs表达CD86和CD80,说明重组的OMVs可激活树突状细胞,促进其成熟。本研究结果提示,利用Cly A融合特异目的蛋白整合的重组OMVs,可作为外源蛋白质的载体,介导抗原呈递作用,在设计与制备疫苗中具有潜在的应用价值。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心;
【基金】：云南省科技计划项目(No.2016FA049) 北京协和青年基金和中央高校基本科研业务费专项资金(No.3332015197;No.3332016117) 北京协和医学院研究生创新基金项目(No.10023-0710-1003);北京协和医学院病原生物研究所基本科研业务费项目(No.2014IPB107)资助~~
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 云南省科技计划项目(No.2016FA049);北京协和青年基金和中央高校基本科研业务费专项资金(No.3332015197、No.3332016117);北京协和医学院研究生创新基金项目(No.10023-0710-1003)和北京协和医学院病原生物研究所基本科研业务费项目(No.2014IPB107)资助*联系人Tel:0871-6833928，

本文编号：1298868