流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

发布时间：2017-12-17 22:03

  本文关键词：流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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【摘要】：目的建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的线性、特异性、精密性、灵敏度及可行性。采用新建立的荧光定量PCR法对16株流感疫苗主种子批毒种进行外源性EDSV检测。结果该方法的最佳线性范围为1×10~4~1×10~9 copies/μl,回归曲线为y=-3.385 x+39.616,R~20.99;与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应;试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均2%;灵敏度为101 copies/μl;该方法检测P0代样品的最低检测限为10-6掺入体积比例,血清学方法检测P0~P3代样品的最低检测限为10~(-2)~10~(-3)掺入体积比例。该方法检测16株流感毒种中外源性EDSV的结果均为阴性,与血清学方法检测结果一致。结论成功建立了检测EDSV的荧光定量PCR法,提高了检测灵敏度和检测效率,更好地满足了流感疫苗应急检验中快检的要求。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所;
【基金】：中国食品药品检定研究院中青年基金项目(2013NC2)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 目前,接种流感疫苗是预防流感最有效的方法。由于流感疫苗的制备工艺中需要使用大量鸡胚增殖流感病毒,而鸡胚本身可能携带或感染外源性禽病毒,污染流感病毒,进而影响疫苗的安全性,因此,根Corresponding author:YUE Bing-fei,E-mail:y6784@126.com据《中国药典》三部(2010版)要

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