FK506结合蛋白25及其突变体与CLIC1蛋白在真核细胞内共定位的研究

发布时间：2017-12-20 20:36

  本文关键词：FK506结合蛋白25及其突变体与CLIC1蛋白在真核细胞内共定位的研究　出处：《安徽医科大学学报》2016年10期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的研究FK506结合蛋白25(FKBP25)野生型及其突变体在真核细胞内的表达、定位及与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的共定位情况。方法以pc DNA3.1-FKBP25-FLAG为模板,分别构建以p CDGFP为载体的FKBP25野生型及其缺失突变体FKBP25(1~42 aa)、FKBP25(1~110aa)、FKBP25(43~224 aa)、FKBP25(43~110 aa)、FKBP25(111~224 aa)的真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot法检测重组蛋白表达情况;将上述质粒分别与带FLAG标签的CLIC1质粒共转染至COS7细胞,激光共聚焦扫描显微镜下观察、分析荧光共定位情况。结果成功构建了p CDGFP-FKBP25基因的一系列真核表达质粒;Western blot显示:p CDGFP-FKBP25及其突变体p CDGFPFKBP25(1~42 aa)、p CDGFP-FKBP25(1~110 aa)、p CDGFPFKBP25(43~110 aa)、p CDGFP-FKBP25(43~224 aa)、p CDGFP-FKBP25(111~224 aa)均能在HEK 293T细胞中有效表达;GFP-FKBP25野生型在COS7细胞中主要分布在细胞质中,细胞核中表达较少,而突变体在细胞质、细胞核均有表达,而且细胞核中的表达多于野生型。共定位实验结果表明:野生型FKBP25蛋白与CLIC1蛋白在细胞质内存在明显的共定位现象。其3个缺失突变体与CLIC1蛋白的共定位明显减少,而且共定位也存在区别:FKBP25-N与CLIC1共定位主要于细胞核中,部分分布于细胞质;FKBP25-PC和FKBP25-C与CLIC1只共定位于细胞质中。结论荧光共定位实验观察到FKBP25野生型及其3种突变体FKBP25(1~42aa)、FKBP25(43~224 aa)、FKBP25(111~224 aa)与CLIC1蛋白存在不同程度的共定位现象,为进一步揭示FKBP25的生物学功能提供了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学生命科学学院生物教研室;安徽医科大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金青年基金(编号:81201368)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 2016-05-30接收FK506结合蛋白(FK506 binding proteins,FK-BP)是高度保守的分子伴侣蛋白家族,能与FK506和雷帕霉素(RAPA)结合[1]。该家族广泛存在于真核生物中,不同生物之间FKBP的同源性很高,在生物进化过程中具有高度的保守性。研究[2]表明该家族成员都具有肽基脯氨酸异构酶(

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本文编号：1313348