犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用

发布时间：2017-12-21 04:00

  本文关键词：犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2016年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至E.coli BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。
【作者单位】： 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;
【基金】：国家自然科学基金(81260247) 宁夏高等学校科学技术研究项目(2002260503)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 犬博卡病毒(canine bocavirus,CBV)即(minutevirus of canine,MVC)的感染与呼吸道及肠道急性感染性疾病关系密切。在博卡病毒家族中,除CBV外,还有牛博卡病毒(bovine parvovirus,BPV)、人博卡病毒(human bocavirus,HBo V)以及在黑猩猩、海狮、猪等动物体内新发现的博卡病毒家族

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