副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

发布时间：2017-12-25 01:04

  本文关键词：副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建　出处：《军事医学》2016年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR)。PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入p BAD33质粒中,构建回补质粒。将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。将vop N的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vop N的调控关系。结果与结论 Lac Z结果表明,CalR负调控vop N的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础。
【作者单位】： 江苏大学医学院;军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【基金】：江苏大学高级人才科研启动基金项目(14JDG166) 病原微生物生物安全国家重点实验室开放研究基金资助项目(SKLPBS1438;SKLPBS1437)
【分类号】：R378;Q78
【正文快照】： 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐性革兰阴性弧菌,广泛分布于浅海海水及海洋生物中。当人们食用了被其污染的海产品时,可能引起以腹泻、呕吐、发热等为主要症状的急性胃肠炎,严重者可导致脱水、休克,甚至死亡[1]。副溶血弧菌可表达多种致病性毒力因子,如耐热直

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本文编号：1330694