美洲大蠊几丁质酶基因的原核表达及蛋白纯化

发布时间：2017-12-26 10:13

  本文关键词：美洲大蠊几丁质酶基因的原核表达及蛋白纯化　出处：《基因组学与应用生物学》2016年09期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建成功的pET32a-Cht1重组表达质粒导入大肠埃希菌Rosetta中,分别对诱导剂IPTG浓度和诱导时间进行优化,确定最佳诱导浓度和诱导时间,并对表达产物进行可溶性分析。表达产物经镍离子柱纯化后通过Western Blot鉴定。结果表明,美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1成熟肽基因编码区长1 083 bp,编码360个氨基酸。最佳诱导浓度和诱导时间分别为0.2 mmol/L和4 h。所得重组蛋白大小约60 k D,与预期结果大小一致,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Western Blot鉴定重组蛋白可与6×His-tag单克隆抗体特异性结合。说明成功构建了原核表达载体pET32a-Cht1,并诱导表达获得了重组几丁质酶蛋白。
【作者单位】： 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室;贵州医科大学基础医学院生物学教研室;
【基金】：贵州省科技厅项目黔科合LH字[2015]7363号;贵州省科技厅黔科合LH字[2014]7085号基金共同资助
【分类号】：Q78;R384
【正文快照】： Prokaryotic Expression and Purification of Chitinase Gene of PeriplanetaamericanaLi Hongwei1Wang Jiping2Zhang Di2Zhang Chunlin2*Zhao Wenjing2Zhang Jing2Zhai Suzhen21 Department of Anatomy,Guizhou Medical University,Guiyang,550025;2 Department of Biology,

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本文编号：1336813