A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛

发布时间：2017-12-26 14:28

  本文关键词：A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测　出处：《军事医学》2016年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(Bo NT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成Bo NT/A LC序列,克隆至p TIG质粒,转化BL21(DE3)plys S感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经"吸附-洗脱-扩增"程序淘选富集抗体并进行特异性筛选。PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性。结果可溶性表达的Bo NT/A LC占全菌蛋白的36.8%,纯化后蛋白纯度达99%。从噬菌体抗体库中筛选到10株单抗,选择其中特异性最好的两株单抗Lab1、Lab2制备了全抗,Western印迹和ELISA检测结果显示其可特异性识别结合Bo NT/A LC蛋白。结论该研究得到了两株特异性的Bo NT/A LC抗体,可能用于A型肉毒毒素检测和肉毒中毒治疗。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所;沈阳药科大学生命科学与生物制药学院;
【分类号】：R392
【正文快照】： 肉毒神经毒素(肉毒毒素,botulinum neurotoxin,Bo NT)是一类由厌氧的肉毒梭菌产生的神经毒素,是迄今已知毒性最强的蛋白毒素,其毒性分别是有机磷神经毒剂VX和沙林的1.5万倍和10万倍[1]。肉毒毒素包括A~G 7种血清型,其中A、B、E和F能引起人类肉毒中毒,A型最为常见[2]。各型毒素

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本文编号：1337632