血管紧张素Ⅱ上调心肌细胞内脂素表达的受体机制

发布时间：2017-12-27 12:24

本文关键词：血管紧张素Ⅱ上调心肌细胞内脂素表达的受体机制　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：脂肪组织不仅是储存能量的器官，也是一个重要的内分泌器官。脂肪细胞分泌的一系列血管活性物质被称为脂肪因子，如瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)和脂联素(Adiponectin)等。脂肪因子在维持机体正常的能量代谢、炎症反应、血管内皮细胞和平滑肌细胞功能以及应激反应等众多方面发挥了重要作用。肥胖患者往往因为脂肪组织堆积，脂肪细胞体积增大,导致脂肪因子分泌失调,最终引起动脉粥样硬化、高血压、冠心病、糖尿病、代谢综合征等一系列相关疾病。Samal等在外周血淋巴细胞中发现了一种可以促进前B细胞增殖的蛋白质，称为前B细胞克隆增强因子（PBEF）。Rongvaux等发现，PBEF是细胞质中的一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸生物合成酶。Fukuhara等在内脏脂肪发现了一种与PBEF相类似的脂肪细胞因子称为内脂素(Visfatin)。Visfatin是一个52-kDa的二聚体蛋白，每个单体含有491氨基酸，每个单体由19β-折叠和13个α-螺旋及两个结构域构成。二聚体蛋白中心接有两个活性位点。最近的研究报告结果显示，Visfatin可以在骨髓，，肝脏和肌肉，脑，肾，脾，睾丸，肺等组织表达，但在内脏脂肪组织中高度表达。这已在一些肥胖动物模型中证实，内脏脂肪组织中Visfatin表达量较其他组织更多。最近Brown等报道，Visfatin具有类胰岛素作用，能够调节胰岛素分泌，降低血糖，促进脂肪组织的分化与合成。不仅如此，Visfatin还可以调节血管平滑肌的成熟和胰岛素的分泌，并参与炎症反应和免疫功能的调节。此外还有文献报道Visfatin还参与脂质代谢，并可能在稳定斑块过程中起重要作用。肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）在多种疾病状态的病理生理中起着显著作用。RAAS的异常激活，可导致血管平滑肌痉挛、心肌肥厚和纤维化，引起一系列心脏、血管和肾脏并发症。大量关于RAAS的临床研究已被证明，阻断RAAS对高血压、急性心肌梗死、慢性心脏衰竭、中风和糖尿病肾病患者有益。由此推论肾素-血管紧张素-醛固酮(RAAS)系统包括其激活产生的细胞因子及信号传导在冠心病、糖尿病、高血压及炎症反应等众多疾病的病理生理和发病机制过程中起重要作用。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是RAAS中最重要的生物活性物质。AngⅡ受体有AT1~4,其中AngⅡ大部分的生理作用是通过AT1受体介导的。S.D. Crowley等通过将AT1受体缺陷小鼠肾脏移植至正常小鼠的方法，发现血管紧张素Ⅱ在许多组织中通过AT1受体调节水、电解质重吸收，以防止血容量不足引起的循环衰竭。同时证实了AT1受体在水、电解质重吸收，心力衰竭，高血压病的病理生理发展过程有着重要作用。S.B. Gurley等更进一步通过敲除肾小管上皮细胞AT1受体的实验发现，AT1受体通过调节NHE3钠-质子交换泵来调节水及电解质的重吸收。Schmidt-Ott KM等还发现AngⅡ作用AT1受体可以触发血管平滑肌细胞反应，导致细胞增殖、迁移并促进生长因子和细胞外基质的产生。也有学者发现AngⅡ可以通过AT1受体介导心肌成纤维细胞胶原合成和分泌，促进心肌细胞纤维化。而AT2仅在胎儿时期高度表达，出生后表达下降，除了肾上腺髓质、子宫、卵巢、血管内皮及大脑的特定区域还存在高密度表达，在健康成人心肌细胞上其表达远少于AT1。Lucius R及Nio Y等发现AT2受体某些特殊情况下如心力衰竭、心肌梗死恢复以及皮肤与神经系统受损修复等情况下表达会上调，这预示着AT2受体可能具有介导调节增殖、促进细胞分化，促进胚胎发育和血管形成及促进伤口愈合、组织修复的作用。Munzenmaier DH等还通过给予灌服AT1受体拮抗剂大鼠AngⅡ干预的实验发现，给予AngⅡ干预后，大鼠血压未引起急剧升高，同时降压作用明显增强。继续给予AT2阻断剂后,发现降压作用却明显降低。由此推论AT2受体可能介导血管舒张反应，协助AT1受体拮抗剂起降压作用。AT3和AT4作用尚未明确，以上实验及研究表明，AngⅡ受体在许多心血管疾病的病理生理发展过程中其重要作用。以往的研究发现Visfatin可能在心血管疾病中起重要作用，已有实验证实AngII可以促进心肌细胞表达Visfatin，并在AngII10-6mmol/l，作用24小时条件下，心肌细胞表达Visfatin水平最高。但到目前为止，还没有任何研究探讨血管紧张素Ⅱ促进心肌细胞Visfatin表达上调的受体机制。本研究通过给予不同AngII受体阻断剂干预，以进一步了解心肌细胞Visfatin表达与AngII受体关系。为了解心血管疾病的发病机制增加了新内容、新思路,为临床防治提供一个新的靶点。方法：在无菌试验条件下不分性别的取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞进行原代培养，在48小时含血清培养，24小时撤血清培养之后，选取形态及生长状态良好的心肌细胞随机分为4组：⑴空白对照组、⑵AngⅡ干预组、⑶AngⅡ+AT1R（替米沙坦）组、⑷AngⅡ+AT2R（PD123319）组，后三组均给予AngⅡ10-6mol/L干预24h。通过RT-PCR和ELISA技术检测心肌细胞Visfatin的表达。结果： 1体外成功培养新生SD大鼠心肌细胞。 2给予AngII干预后Visfatin-mRNA及蛋白表达均高于无AngII作用的组。 3AngⅡ+AT1R（替米沙坦）组和AngⅡ+AT2R（PD123319）组Visfatin-mRNA及蛋白表达有明显差异，AngⅡ+AT2R（PD123319）组Visfatin-mRNA及蛋白表达明显高于AngⅡ+AT1R（替米沙坦）组。 4AngⅡ+AT1R（替米沙坦）组和AngⅡ干预组Visfatin-mRNA及蛋白表达有明显差异，AngⅡ干预组Visfatin-mRNA及蛋白表达明显高于AngⅡ+AT1R（替米沙坦）组。 5AngⅡ+AT2R（PD123319）组和AngⅡ干预组Visfatin-mRNA及蛋白表达无明显差异。结论：血管紧张素Ⅱ主要通过AT1受体上调体外培养的心肌细胞Visfatin表达水平。
[Abstract]:Objective: adipose tissue is not only an organ that stores energy, but also an important endocrine organ. A series of vasoactive substances secreted by adipocytes are called adipokines, such as leptin (Leptin), tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha), leukocyte -6 (IL-6), resistin (Resistin) and adiponectin (Adiponectin). Adipokines play an important role in maintaining normal energy metabolism, inflammatory response, vascular endothelial cells, smooth muscle cell function and stress response. Obesity is often caused by adipose tissue accumulation and increased adipocyte volume, resulting in the imbalance of adipokine secretion, which eventually leads to atherosclerosis, hypertension, coronary heart disease, diabetes and metabolic syndrome. Samal and other proteins in peripheral blood lymphocytes have been found to promote the proliferation of pre - B cells, known as the clone enhancer (PBEF) of the former B cells. Rongvaux and others found that PBEF is a nicotinamide adenine dinucleotide biosynthesis enzyme in the cytoplasm. Fukuhara and other visceral fat found a kind of adipocytokine similar to PBEF, called Visfatin. Visfatin is a 52-kDa two polymer protein, each monomer contains 491 amino acids, each monomer consists of 19 beta - fold and 13 alpha helix and two domains. There are two active sites in the center of the two polymer protein. Recent studies show that Visfatin can be expressed in bone marrow, liver and muscle, brain, kidney, spleen, testis, lung and other tissues, but it is highly expressed in visceral adipose tissue. It has been confirmed in some obese animal models that the expression of Visfatin in visceral adipose tissue is more than that of other tissues. Recently, Brown and other reports have reported that Visfatin has the role of insulin like, regulating insulin secretion, reducing blood sugar and promoting the differentiation and synthesis of adipose tissue. In addition, Visfatin also regulates the maturation of vascular smooth muscle and the secretion of insulin, and is involved in the regulation of inflammatory response and immune function. In addition, it is reported that Visfatin also participates in lipid metabolism and may play an important role in stabilizing plaque.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】