缺氧促进MSCs成脂分化的机制研究

发布时间：2017-12-27 22:13

  本文关键词：缺氧促进MSCs成脂分化的机制研究　出处：《中南大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 缺氧 间充质干细胞 成脂分化

【摘要】：间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cell, MSCs)是肿瘤微环境的重要组成成分,对肿瘤侵袭和转移发挥重要的影响。同时肿瘤微环境对于间充质干细胞的分化和功能也产生重要的影响。两者之间构成复杂的调控网络。缺氧是肿瘤微环境的一个重要环境因素。本研究拟研究缺氧对MSCS的分化潜能的影响,并探寻参与作用的重要调控分子。 [缺氧抑制MSCs成骨分化,促进MSCs成脂分化] MSCs具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能。我们将MSCs在0.2%O2的缺氧条件下分别使用诱导培基和普通培基处理人骨髓来源MSCs3天,应用碱性磷酸酶染色和油红O染色后观察细胞内成骨细胞标志性的酶以及脂滴形成积累情况,并用Real-time PCR法检测MSCs的成骨细胞和脂肪细胞标志分子的表达,结果表明在缺氧条件了MSCs的成骨分化潜能降低；成脂分化潜能增高。 [缺氧MSCs成脂分化的调控网络构建] 我们应用Real-time PCR芯片筛选缺氧条件下差异表达的MSCs成脂分化相关分子。筛选出10个上调分子,11个下调分子。我们把差异表达的分子构建了缺氧条件下的MSCs的成脂分化的调控网络。结果发现C/EBP家族和PPAR-γ处于调控网络的中心位置,调控多个成脂相关基因表达。 [缺氧MSCs成脂分化相关调控因子的确定] 我们进一步验证了在缺氧条件下MSCs的成脂分化关键转录因子PPAR-γ表达下调,转录因子C/EBPs表达明显增高。同时对MSCs使用PPAR-γ抑制剂或C/EBPs抑制剂后在缺氧条件下进行成脂分化实验,在细胞水平和分子水平检测MSCs的成脂分化水平,结果表明PPAR-γ的抑制剂不能抑制缺氧下MSCs的成脂分化。应用C/EBPs的抑制剂可以明显抑制缺氧条件下的MSCs的成脂分化潜能。因此我们认为在缺氧条件下,MSCs通过PPAR-γ非依赖性通路促进成脂分化。转录因子C/EBPs在缺氧MSCs成脂分化过程中发挥重要的作用。 为了明确Hif-1α在缺氧环境下,对于MSCs的成脂分化潜能的影响,我们建立了Hif-1α的shRNA稳定表达MSC细胞株。Hif-1α表达封闭的MSCs在细胞水平上没有明显降低MSCs在缺氧下形成的脂滴数量,但是能降低部分成脂相关分子的表达。结果表明缺氧对于MSCs的成脂分化潜能的促进部分依赖于Hif-1α。C/EBPs抑制剂和Hif-1α封闭同时作用下,MSCs在缺氧下的成脂分化程度相较于单独使用C/EBPs抑制剂被更加强烈地抑制,提示Hif-1α和C/EBPs在缺氧下存在相互作用机制,协同作用促进MSCs成脂分化。 综上所述,缺氧对MSCs成脂分化有促进作用；该促进作用不依赖于PPAR-γ途径；C/EBPs在缺氧促进MSCs成脂分化的过程中扮演了关键角色,Hif-1α和C/EBPs在缺氧下条件下存在相互作用,协同作用促进MSCs成脂分化。该研究阐明了在缺氧的微环境下的MSCs分化潜能的改变,为进一步研究分化后的MSCs对于肿瘤细胞的影响提供依据。
[Abstract]:Mesenchymal Stem Cell (MSCs) is an important component of the tumor microenvironment, which plays an important role in tumor invasion and metastasis. At the same time, the tumor microenvironment also has an important effect on the differentiation and function of mesenchymal stem cells. The two constitute a complex regulatory network. Anoxia is an important environmental factor in the microenvironment of tumor. This study aims to investigate the effect of hypoxia on the differentiation potential of MSCS and to explore the important regulatory elements involved in the role of hypoxia.
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 鞠大鹏;詹丽杏;;脂肪细胞分化及其调控的研究进展[J];中国细胞生物学学报;2010年05期

，

本文编号：1343391