细粒棘球绦虫胰岛素受体蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
本文关键词：细粒棘球绦虫胰岛素受体蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 出处：《中国病原生物学杂志》2017年02期 论文类型：期刊论文
【摘要】：目的制备细粒棘球绦虫胰岛素受体(EgIR)蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgIR蛋白的功能提供检测抗体。方法利用Gamier-Robson、Chou-Fasman、DNAMAN等软件预测EgIR蛋白抗原表位,进行引物序列设计。将预测的EgIR基因部分序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli ROSETTA(DE3)株,IPTG诱导蛋白表达,表达产物EgIR蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱纯化后注射免疫家兔10d,收集免疫血清,采用ELISA法测定抗体效价,采用Western blot检测制备的多克隆抗体与EgIR蛋白的结合特性。结果构建的原核表达载体转化DE3后经0.8mmol/L IPTG诱导,成功表达约55ku的EgIR重组蛋白;目的蛋白纯化后的浓度为3mg/ml,纯度为85%;免疫家兔后收集的血清经ELISA法检测,抗体效价1∶51 200;Western blot检测该抗体能与10、5、1ng/ml的EgIR重组蛋白特异结合,该抗体1∶1 000稀释后仍可检测到原头蚴、囊泡蛋白样品中的胰岛素受体蛋白。结论成功制备兔抗EgIR亚基多克隆抗体,为EgIR蛋白的功能和药物靶标研究奠定了基础。
[Abstract]:......
【作者单位】： 新疆医科大学第一附属医院药学部临床药学科;新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81560607,U1303222,81360251) 新疆重大疾病医学重点实验室开放课题资助项目(No.SKLIB-XJMDR-2012-2) 新疆维吾尔自治区包虫病基础医学重点实验室开放课题(No.XJDX0202-2013-10)
【分类号】：R383.3
【正文快照】： 包虫病是由棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)的中绦期幼虫寄生在哺乳动物脏器内引起的人畜共患寄生虫病[1]。在我国,包虫病主要分布于新疆、青海、四川、西藏等省(自治区)的牧区[2]。胰岛素受体家族是一种重要的多功能细胞调控因子,属于受体酪氨酸激酶家族(Receptor Ty
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