髓过氧化物酶诱导内皮细胞凋亡的分子机制

发布时间：2017-12-29 09:29

  本文关键词：髓过氧化物酶诱导内皮细胞凋亡的分子机制　出处：《中南大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的探讨髓过氧化物酶诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制。 方法 1.用不同浓度(0.1u/ml,0.2u/ml,0.4u/ml,0.6u/ml)的髓过氧化物酶干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12),采用MTT比色法观察各组的细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测各组的细胞凋亡率。 2.采用逆转录PCR、Real-time PCR检测内皮细胞caspase-3、bax mRNA的表达。逆转录PCR用灰度分析仪测量各灰度值,计算各灰度值与内参(GAPDH)灰度值之比；Real-time PCR采用比较阈值法计算不同干预组与阴性对照组相比的相对表达量。 3.采用western-blot法检测内皮细胞caspase-3、bax蛋白的表达。用灰度分析仪测量各条带灰度值,计算各灰度值与内参(p-actin)灰度值之比。 结果 1. HUVEC-12细胞生长抑制率及凋亡率的变化：与阴性对照组相比,0.4u/ml MPO干预组、0.6u/ml MPO干预组和阳性对照组HUVEC-12细胞生长抑制率明显升高(P0.05),0.2u/ml干预组、0.4u/ml MPO干预组、0.6u/ml MPO干预组的内皮细胞凋亡率明显升高(P0.05); MPO对内皮细胞生长的抑制以及诱导凋亡的作用具有浓度依赖性(P0.05)。 2. HUVEC-12细胞caspase-3mRNA及蛋白的表达：与阴性对照组相比,较高浓度(逆转录PCR检测的浓度为0.4u/ml、0.6u/ml, Real-time PCR为0.2u/ml、0.4u/ml和0.6u/ml) MPO干预组和阳性对照组HUVEC-12细胞caspase-3mRNA表达明显升高(P0.05)。与阴性对照组相比,0.4u/ml MPO干预组、0.6u/ml MPO干预组和阳性对照组内皮细胞caspase-3前体片段蛋白表达明显降低(P0.05),caspase-3的活化片段蛋白表达明显升高(P0.05)。且MPO诱导caspase-3mRNA及蛋白的表达具有浓度依赖性(P0.05)。 3. HUVEC-12细胞bax mRNA及蛋白的表达：与阴性对照组相比,较高浓度(逆转录PCR检测的浓度为0.4u/ml、0.6u/ml, Real-time PCR为0.2u/ml、0.4u/ml和0.6u/ml) MPO干预组和阳性对照组HUVEC-12细胞baxmRNA表达明显升高(P0.05)。与阴性对照组相比,0.4u/ml MPO干预组、0.6u/ml MPO干预组和阳性对照组内皮细胞bax蛋白表达明显升高(P0.05)。且MPO诱导bax mRNA及蛋白的表达具有浓度依赖性(P0.05)。 结论 1.一定浓度的髓过氧化物酶可以诱导HUVEC-12内皮细胞凋亡,且在特定浓度范围内具有浓度依赖性。 2.髓过氧化物酶诱导的HUVEC-12内皮细胞凋亡可能是通过激活caspase-3信号通路实现的。 3.Bax也可能参与了髓过氧化物酶诱导的HUVEC-12内皮细胞凋亡过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：1349733