日本血吸虫性激素相关受体EsRRBL1和PGMRC2的初步研究
本文关键词：日本血吸虫性激素相关受体EsRRBL1和PGMRC2的初步研究 出处：《中国农业科学院》2012年硕士论文 论文类型：学位论文
更多相关文章： 日本血吸虫 性激素受体 SjEsRRBL1 SjPGMRC2
【摘要】：日本血吸虫病（Schistosomiasis japonicum）是由日本血吸虫（Schistosome japonicum）感染所引起的一种严重危害人畜健康的寄生虫病。日本血吸虫可感染人等40余种哺乳动物，但不同宿主对血吸虫的适宜性存在较大差异。血吸虫基因组研究表明该寄生虫具有编码激素的受体，并形成完整的激素通道，可以利用宿主激素促进自身的生长发育和成熟。本课题组近期研究表明，一些不同适宜性宿主来源血吸虫虫体中差异表达的基因或者蛋白可能对血吸虫生长发育至关重要。本研究在不同宿主来源10d血吸虫童虫基因芯片研究的基础上，选取了在血吸虫抗性宿主东方田鼠来源童虫中呈显著低表达的两个日本血吸虫性激素相关新基因——雌激素相关受体β类似物1（SjEsRRBL1）和膜相关的孕酮受体组件2（SjPGMRC2），开展了以下研究。 1.宿主性别对于血吸虫生长发育的影响 采用同一周龄、不同性别的BABL/c小鼠，在同一时间、同一条件下感染同一批钉螺逸出的尾蚴，对不同性别宿主来源的日本血吸虫成虫的发育情况及虫体大小进行了两次实验观察。初步结果表明，雌性小鼠中血吸虫的发育率（56.5%和64.1%）显著高于雄性小鼠（40.8%和47%），差异显著(P＜0.01），同时雌鼠来源的雌、雄虫体都比雄鼠来源的雌、雄虫体略大一些，但差异不显著。 2.日本血吸虫雌激素相关受体β类似物1（EsRRBLI）的研究 利用PCR技术首次扩增获得SjEsRRBL（1JQ612589）的全长cDNA序列，其开放阅读框（ORF）为1374bp,编码458个氨基酸，理论分子量是52.2kDa，理论等电点是4.71。构建了pET32a-SjEsRRBLI重组表达质粒，并在大肠杆菌中成功表达，重组蛋白以包涵体的形式存在，分子量大小为72kDa。实时定量PCR和western blotting分析都表明SjEsRRBL1在检测的血吸虫童虫和成虫各个发育阶段都有转录和表达，其中在14d、18d、23d和28d的血吸虫中转录和蛋白表达水平较35d和42d虫体高。同时SjEsRRBL1在血吸虫抗性宿主东方田鼠来源虫体中表达量显著低于易感性宿主BABL/c小鼠来源虫体，在雌性小鼠来源虫体中表达量要高于在雄性小鼠来源虫体中的表达量。Western blotting分析表明重组蛋白rSjEsRRBL1具有较好的抗原性和免疫原性，rSjEsRRBL1免疫鼠血清能特异性识别血吸虫虫体中的天然蛋白。两次动物保护实验结果表明rSjEsRRBL1在BALB/c小鼠中分别诱导了30.84%和30.70%的减虫率(P 0.01)及32.59%和35.61%的减卵率(P0.01)，说明该重组蛋白能够在小鼠体内诱导部分免疫保护效果。ELISA实验结果表明一免后小鼠即产生了抗重组蛋白SjEsRRBL1的特异性IgG抗体，并且一直维持在一个较高的水平。细胞免疫和体液免疫分析结果表明，rSjEsRRBL1结合206佐剂免疫小鼠后诱导了Th1/Th2混合型并以Th1型占主导的免疫反应。本研究表明SjEsRRBL1可能在日本血吸虫的生长发育中起着重要的作用。 3.日本血吸虫膜相关的孕酮受体组件2（PGMRC2）的研究 利用PCR技术首次扩增获得SjPGMRC2（FN317689.1）去除信号肽的部分cDNA序列，大小为480bp,编码160个氨基酸，理论分子量为18162.55Da，理论等电点为6.12。构建了重组表达质粒pET32a-SjPGMRC2，并在大肠杆菌中成功表达，重组蛋白可溶性表达，分子量为38kDa。实时定量PCR分析表明SjPGMRC2在检测的血吸虫童虫和成虫各个发育阶段都有转录和蛋白表达，在18d和23d血吸虫中转录水平较高。SjPGMRC2在血吸虫抗性宿主东方田鼠来源虫体中表达量显著低于易感性宿主BABL/c小鼠来源虫体，在雌性小鼠来源虫体中表达量要高于在雄性小鼠来源虫体中的表达量。Western blotting分析结果表明重组蛋白rSjPGMRC2具有较好的抗原性和免疫原性。两次动物保护实验结果表明重组蛋白SjPGMRC2在BALB/c小鼠中分别诱导了22.08%和20.097%的减虫率(P 0.01)，表明重组蛋白SjEsRRBL1能够在小鼠体内诱导部分免疫保护效果。特异性抗体及淋巴细胞培养上清液细胞因子的测定结果表明，rSjPGMRC2结合206佐剂免疫小鼠后诱导了Th1/Th2混合型并以Th1型占主导的免疫反应。筛选获得特异性针对SjPGMRC2的siRNA，利用该siRNA在小鼠体内对SjPGMRC2基因进行特异性干扰，获得24%的减虫率。本研究表明SjPGMRC2可能对日本血吸虫生长发育有重要作用。 本研究首次对两个性激素相关的日本血吸虫新基因SjEsRRBL1和SjPGMRC2进行了克隆、表达，分析了这两个基因在不同适宜性宿主、不同性别宿主以及不同发育阶段虫体中的表达情况，评估了其在小鼠体内诱导的免疫保护效果，，分析了其诱导的免疫机制。本文为深入探讨宿主性别和不同激素环境对于血吸虫生长发育的影响提供了重要信息，为筛选日本血吸虫新的疫苗候选分子和药靶标提供了重要基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 周东明,易新元,曾宪芳,王敏,张顺科;SD大鼠天然抗日本血吸虫感染免疫特性的初步研究[J];地方病通报;2001年04期
2 刘金明,傅志强,李浩,魏梅雄,林矫矫;东方田鼠ADCC体外杀伤日本血吸虫童虫效果的初步观察[J];寄生虫与医学昆虫学报;2001年04期
3 穆莉;李海云;;寄生虫与宿主之间类固醇激素相关的研究进展[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年04期
4 何毅勋，倪传华，刘和香，郁琪芳，胡亚青;不同性别及月龄的钉螺对日本血吸虫的易感性[J];寄生虫与医学昆虫学报;1994年04期
5 朱国正;汪英华;雷观愚;刘瑞三;;东方田鼠的实验室饲养及其抗血吸虫感染特性[J];上海实验动物科学;1991年04期
6 何永康,罗新松,张新跃,喻鑫玲,林金莲,李毅,李岳生,贺宏斌,刘述先;东方田鼠天然抗血吸虫感染免疫特性的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;1998年S1期
7 张新跃,何永康,李毅,罗新松,刘述先,喻鑫玲,林金莲,李岳生;正常东方田鼠血清及脾细胞体外杀血吸虫童虫作用的初步观察[J];中国血吸虫病防治杂志;2001年04期
8 陈贤义,姜庆五,王立英,赵根明,赵琦,顾弋安,韦建国,郝阳;2001年全国血吸虫病疫情通报[J];中国血吸虫病防治杂志;2002年04期
9 蒋守富,魏梅雄,林矫矫,潘彩娥,李浩,曹琳,何艳燕,傅志强;东方田鼠血清被动转移抗日本血吸虫的保护力研究[J];中国寄生虫病防治杂志;2004年05期
10 何毅勋,郁琪芳,胡亚青,张永年;中国大陆日本血吸虫品系的研究——Ⅱ.哺乳动物的易感性[J];寄生虫学与寄生虫病杂志;1990年04期
相关博士学位论文 前2条
1 洪炀;日本血吸虫童虫在不同敏感性宿主体内差异表达蛋白的研究[D];南京农业大学;2011年
2 彭金彪;不同宿主来源日本血吸虫童虫差异表达基因的研究[D];中国农业科学院;2010年
本文编号：1351623
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/1351623.html
