表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建及其致病性的研究
本文关键词：表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建及其致病性的研究 出处：《内蒙古农业大学》2011年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)属于副粘病毒科偏肺病毒属,是偏肺病毒属中唯一能感染人类的单股负链不分节段RNA病毒。现有流行病学资料显示,HMPV呈全球流行,为儿科较为常见的呼吸道病原。临床症状与肺病毒属的呼吸道合胞病毒(RSV)感染相似,出现严重的咳嗽,气管炎和肺炎,经常伴有高热,肌痛和呕吐,并导致免疫功能不全者死亡。 HMPV主要有A、B两型,分别以加拿大分离株CAN97-83(NL/1/00)及CAN98-75(NL/1/99)为代表,每型内又可分为两个不同的亚型。 本研究采用反向遗传学技术,在HMPV NL/1/99(B型)代表株基因组内插入表达增强绿色荧光的外源基因,成功救获了重组病毒rHMPV NL/1/99-EGFP。通过荧光共聚焦、电镜观察及生长动力学研究,证实最终拯救出具有感染性的rHMPV NL/1/99-EGFP重组病毒颗粒且救获病毒保持野生型HMPV的特点。采用改良噬斑形成试验测定病毒滴度,根据Reed-Muench的方法比较分析结果表明,重组病毒rHMPV NL/1/99-EGFP与野生型HMPV NL/1/99的生长动力学曲线及最高生长滴度基本一致。rHMPV NL/1/99-EGFP在Vero-E6细胞连续传代10次仍保持绿色荧光蛋白的稳定表达及其所有生物学特性保持不变。在此基础上,比较研究了rHMPV NL/1/99-EGFP(B型)及rHMPV NL/1/00-EGFP(A型)对小鼠和各细胞的致病性,采用改良噬斑形成试验测定病毒滴度,结果表明,rHMPV NL/1/00-EGFP的感染性及致病力均比rHMPV NL/1/99-EGFP强。 本研究填补了国内相同研究领域的空白,首先,重组病毒对外源基因的稳定表达使HMPV具有作为疫苗载体应用的可能性。其次,以EGFP蛋白作为病毒示踪物对实验条件要求不高,便于检测,使得在rHMPV NL/1/99-EGFP基础上进行病毒致病机制和基因功能研究变得更为便利。第三,对两株重组HMPV致病性的研究为病毒基因组的改造,从而为HMPV减毒活疫苗的研制奠定基础。
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【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R373
【共引文献】
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，本文编号：1353812
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