miR-155调控巨噬细胞炎症反应和脂质摄取的作用及机制

发布时间：2017-12-31 23:01

  本文关键词：miR-155调控巨噬细胞炎症反应和脂质摄取的作用及机制　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2017年08期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的研究miR-155在调控巨噬细胞炎症反应及脂质摄取中的作用及机制。方法使用(0、25、50、100)μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞24 h和50μg/m L ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,应用实时定量PCR检测细胞miR-155的水平;将细胞分为对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/过氧化物酶体增殖物激活受体γ-短发夹RNA(PPARγ-shRNA)组。上述细胞样本用油红O染色观察细胞内脂滴沉积、Filipin染色检测细胞ox-LDL摄取情况,胆固醇检测试剂盒检测细胞总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,实时定量PCR分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平;按实验目的,分别观察miR-155拮抗物(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组)、miR-155模拟物(阴性对照组、miR-155模拟物组)、shRNA干涉PPARγ(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/PPARγ-shRNA组)对RAW264.7细胞中ox-LDL刺激的作用机制,Western blot法检测磷酸化的信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)、PPARγ、CD36和核因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白水平。结果随着ox-LDL剂量和处理时间的增加,miR-155的表达水平逐渐升高;油红O染色、胞内胆固醇含量检测、Filipin染色结果显示,ox-LDL/miR-155拮抗物组油红染色相对吸光度(A)值、TC和FC含量、Filipin的平均荧光强度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL组、ox-LDL/阴性对照组;同样地,ox-LDL/PPARγshRNA组油红O染色A值、TC和FC含量、Filipin的平均荧光强度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL组、ox-LDL/shRNA阴性对照组;ox-LDL/miR-155拮抗剂组中p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表达低于ox-LDL组、ox-LDL/阴性对照组,miR-155模拟物组p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表达高于阴性对照组,ox-LDL/PPARγshRNA组中p-STAT3、CD36和NF-κBp65的蛋白表达较ox-LDL/shRNA阴性对照组的表达水平较ox-LDL组显著降低。结论 miR-155通过调控PPARγ,影响STAT3/NF-κB信号通路及CD36的表达,进而影响巨噬细胞的炎症反应和胆固醇代谢。
[Abstract]:Objective to study the role and mechanism of miR-155 in regulating macrophage inflammatory response and lipid uptake. 100) 渭 g / mL oxidized low density lipoprotein (LDL). RAW264.7 cells were treated with 50 渭 g / mL ox-LDL for 24 h and 50 渭 g / mL ox-LDL, respectively. The level of miR-155 was detected by real-time quantitative PCR 24 h after 6o 12h. The cells were divided into two groups: ox-LDL / negative control group, ox-LDL / miR-155 antagonist group, ox-LDL / miR-155 antagonist group and ox-LDL / shRNA negative control group. In the ox-LDL / peroxisome proliferator activated receptor 纬 -short hairpin RNA(PPAR 纬 -shRNA group, the lipid deposition was observed by oil red O staining. The uptake of ox-LDL was detected by Filipin staining, and the total cholesterol (TC) and free cholesterol (FCc) contents were detected by cholesterol detection kit. The mRNA levels of TNF- 伪, IL-1 尾 and IL-6 were measured by real-time quantitative PCR. MiR-155 antagonists (ox-LDL / negative control group, ox-LDL / miR-155 antagonist group) were observed respectively. MiR-155 mimics (negative control group, miR-155 analog group), shRNA interference PPAR 纬 (control group). The mechanism of ox-LDL stimulation in RAW264.7 cells induced by ox-LDL / PPAR 纬 -shRNA in ox-LDL/shRNA negative control group. Western blot assay was used to detect phosphorylated signal transducers and activators of transcription3, p-STAT3 and PPAR- 纬. The protein levels of CD36 and NF- 魏 Bp65 (NF- 魏 Bp65) increased with the increase of ox-LDL dose and treatment time. Oil red O staining and intracellular cholesterol content were detected by Filipin staining. The results of oil red staining showed that the relative absorbance of oil red group was higher than that of ox-LDL / miR-155 antagonist group. The average fluorescence intensity of Filipin and the levels of IL-6 and IL-1 尾 mRNA in TNF- 伪 were lower than those in ox-LDL group. Similarly, the average fluorescence intensity and TNF- 伪 of TNF- 伪 in the oil red O staining group of ox-LDL / PPAR 纬 shRNA group were measured. The levels of IL-6 and IL-1 尾 mRNA were lower than those of ox-LDL group. The expression of pSTAT3PPAR- 纬 CD36 and NF- 魏 Bp65 in ox-LDL/miR-155 antagonist group was lower than that in ox-LDL group. The expression of p-STAT3PPAR 纬 CD36 and NF- 魏 Bp65 protein in ox-LDL / negative control group was higher than that in negative control group. P-STAT3 in ox-LDL/PPAR 纬 shRNA group. The protein expression of CD36 and NF- 魏 Bp65 was significantly lower than that of ox-LDL/shRNA negative control group. Conclusion the expression of NF- 魏 Bp65 protein in ox-LDL group was significantly lower than that in ox-LDL/shRNA negative control group. MiR-155 regulates PPAR 纬. Effects of STAT3 / NF- 魏 B signaling pathway and CD36 expression on macrophage inflammation and cholesterol metabolism.
【作者单位】： 第三军医大学研究生队;成都军区昆明总医院心内科;
【分类号】：R392
【正文快照】： 氧化型低密度脂蛋白(oxygenized low densitylipoprotein,ox-LDL)被巨噬细胞大量摄入而诱导的细胞炎症反应是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生早期的关键性事件[1-2]。非编码RNA(non-codingRNA),如长链非编码RNA(long chain non-coding RNA,ncRNA)、微小RNA(microRNA,miR

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