DFMG对LPC诱导HUVE-12细胞角蛋白18磷酸化的影响

发布时间：2018-01-01 11:18

  本文关键词：DFMG对LPC诱导HUVE-12细胞角蛋白18磷酸化的影响　出处：《湖南师范大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的： 观察新型金雀异黄素(genistein, GEN)类似物7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein, DFMG)拮抗溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine, LPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)凋亡是否涉及对角蛋白18磷酸化表达的调节。 方法： 体外培养人脐静脉内皮HUVE-12细胞,10μmol/L的LPC分别孵育细胞(6h、12h、24h和48h),探索并确定LPC诱导HUVE-12细胞凋亡模型所需的时间。分别用0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG预处理HUVE-12细胞30分钟,再与LPC孵育24小时。然后用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术分析细胞凋亡率,人细胞角蛋白18-M30定量检测试剂盒检测片段CK18的含量,western blotting方法检测细胞角蛋白18、Ser33位和Ser52位磷酸化角蛋白18的表达,免疫共沉淀验证HUVE-12细胞K18/14-3-3复合物的表达。 结果： 1.10μmol/L LPC孵育人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)24h,增加CK18-M30的释放,细胞培养液中CK18-M30的浓度达798.60±8.43mIU/ml,细胞凋亡率达30.98±2.04%,可作为后续实验中LPC诱导HUVE-12细胞凋亡模型的最佳造模时间。 2.0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG使LPC诱导HUVE-12细胞CK18-M30释放减少(P0.001),其细胞培养液的CK18-M30浓度分别是701.00±2.65mIU/ml,599.77±2.30mIU/ml,402.47±4.16mIU/ml,与10μmol/LLPC模型组比较,差异具有统计学意义(P0.001),且作用呈浓度-效应依赖性；较相同浓度GEN组(753.90±5.07mIU/ml,700.97±3.60mIU/ml,548.83±3.98mIU/m1)减少CK18-M30的释放作用更强(P0.05)。 3.0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG分别使LPC诱导HUVE-12细胞凋亡率下降到27.50±2.06%,23.52±2.59%,13.70±2.00%,与10μmol/LLPC模型组比较,差异具有统计学意义(P0.001),且作用强于相同浓度GEN组(29.42±2.09%,27.57±0.76%,24.29±2.49%)(P0.05)。 4. western blotting结果显不：与正常对照组相比,10μmol/LLPC便HUVE-12细胞Ser33位和Ser52位磷酸化角蛋白18表达上调,使未磷酸化角蛋白18表达下调,DFMG和GEN可呈浓度依赖性地拈抗LPC诱导的HUVE-12细胞Ser33位和Ser52位磷酸化角蛋白18表达,相同浓度的DFMG作用强于GEN。 5.免疫共沉淀结果显示：在提取的HUVE-12细胞总蛋白中,在14-3-3抗体免疫沉淀下来的蛋白复合物中可以检测到CK18,同时在CK18抗体免疫沉淀下来的蛋白复合物中也可以检测到14-3-3蛋白,说明CK18与14-3-3蛋白在HUVE-12细胞中存在相互作用。与正常对照组相比,10μmol/LLPC模型组14-3-3蛋白与CK18共沉淀增强。DFMG和GEN均能降低LPC诱导的HUVE-12细胞中14-3-3蛋白与CK18的结合水平,DFMG的这种作用强于GEN。 结论： DFMG拮抗LPC诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)凋亡与其阻断角蛋白18磷酸化表达相关。
[Abstract]:Objective:
The observation model of genistein (genistein, GEN) analogs of 7- two fluorine methoxy -5,4 '- methoxy two fund genistein (7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein, DFMG) antagonist lysophosphatidylcholine (lysophosphatidylcholine, LPC) induced human umbilical vein endothelial cells (HUVE-12) apoptosis is involved in regulation of the expression of phosphorylation of keratin 18.
Method锛，

本文编号：1364292