脂联素对高糖环境下HCM氧化应激及凋亡的影响

发布时间：2018-01-01 23:00

  本文关键词：脂联素对高糖环境下HCM氧化应激及凋亡的影响　出处：《山西医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的通过高糖环境培养人心肌细胞(Human Cardiac Myocytes，HCM)建立心肌细胞氧化应激模型，观察脂联素(adiponectin，ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标SOD、MDA、P66Shc、HO-1及凋亡的影响，从而揭示脂联素对人心肌细胞的可能保护机制。 方法①将体外培养的人心肌细胞随机分为三组：对照组（5.5 mmol/L D-葡萄糖，N组）、高糖组（30mmol/L D-葡萄糖，G组）、高糖+脂联素组（30mmol/L D-葡萄糖+2.5 ug/mlADPN，A组）。②按上述条件分别干预24h、48h、72h。③采用黄嘌呤氧化酶法检测在不同时间点各组细胞的光吸收值（OD值），检测高糖及脂联素对人心肌细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活力的影响。④用代巴比妥酸法测在不同时间点各组细胞的光吸收值（OD值），检测高糖及脂联素对人心肌细胞丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的影响。⑤提取各组细胞的总RNA，逆转录合成cDNA，然后加入引物及SYBR绿色荧光，通过荧光定量PCR法（Real-Time PCR）测定衔接蛋白(adaptin P66Shc)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)在各个时间点上的表达。⑥采用AnnexinV-FITC/PI双标记染色法用流式细胞术检测在不同时间点各心肌细胞的凋亡率。 结果与对照组相比，高糖组SOD含量显著下降，MDA含量显著上升，差异有统计学意义（P＜0.05)，与高糖组相比，脂联素组SOD含量显著上升，MDA含量显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05)。与对照组相比，高糖组HO-1 mRNA表达增高；脂联素组较高糖组表达亦增高，差异有统计学意义（P＜0.05)。与对照组相比，，高糖组P66Shc mRNA表达增高；脂联素组较高糖组表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05)。高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加，而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降。 结论高糖的持续作用可以促进人心肌细胞的凋亡，脂联素则可以纠正由高糖诱导的人心肌细胞的凋亡。脂联素可通过减少P66Shc表达、增加HO-1、SOD表达，增加抗氧化能力，使MDA含量减少，减少氧化应激反应，减少细胞凋亡，可能对糖尿病心肌细胞起保护作用，为临床治疗糖尿病心肌病提供一定的理论依据。
[Abstract]:Objective To study the effects of adiponectin ( ADPN ) on SOD , MDA , P66Shc , HO - 1 and apoptosis in cultured human cardiac myocytes by high glucose environment , and to reveal the possible protective mechanism of adiponectin on human myocardial cells . Methods 鈶

本文编号：1366562