A类清道夫受体介导的脑缺血损伤研究

发布时间：2018-01-03 10:34

本文关键词：A类清道夫受体介导的脑缺血损伤研究　出处：《南京医科大学》2012年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：缺血性脑损伤是一复杂的病理生理学过程，有多个机制参与调节，包括固有免疫系统的激活。固有免疫系统通过模式识别受体家族介导炎症反应，从而加重缺血性脑损伤。A类清道夫受体（SR-A）是一种主要表达于小胶质细胞/巨噬细胞上的模式识别受体，在固有免疫和炎症反应中发挥关键的作用。SR-A功能直接影响小胶质细胞/巨噬细胞的活性，与多种重要疾病的发生发展关系密切。最近的研究结果表明，SR-A通过激活细胞NF-B促进缺血性脑损伤。由于不同亚型的小胶质细胞/巨噬细胞在炎症反应中的作用截然不同，SR-A在这些细胞的极性分化中究竟发挥什么样的作用尚不清楚。本课题围绕SR-A对于缺血引起的小胶质细胞/巨噬细胞激活分型的作用开展了系列研究，同时对缺血性脑损伤的发病机制进行了深入探讨。在大多数的缺血性脑卒中发病过程中，缺血组织在初始阶段的24小时内得不到再灌注。基于这一事实，我们选用永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型来研究SR-A对缺血性脑损伤的影响。我们分别用栓线对野生型（WT）和SR-A-/-小鼠施行永久性的大脑中动脉闭塞，构建MCAO模型。用Western blot和免疫组化检测发现，MCAO后导致小鼠脑组织中SR-A上调；但是流式细胞术检测的结果却表明，SR-A在经典激活型（M1型）和选择激活型（M2型）小胶质细胞/巨噬细胞中的表达并没有明显差异。MCAO后24小时，发现SR-A-/-小鼠脑组织梗死面积显著减少，神经学功能获得改善，同时梗死边缘区的凋亡细胞明显减少，提示SR-A基因敲除缓解了MCAO引起的缺血性脑损伤。接着，我们采用免疫组化和流式细胞术方法，检测缺血后脑组织小胶质细胞/巨噬细胞激活浸润及其极性分化的情况。结果发现，与WT小鼠相比，SR-A-/-小鼠脑组织中激活的小胶质细胞/巨噬细胞总量明显减少，M1型细胞的总量和比例降低，M2型细胞的比例增大。与此相一致，用实时定量PCR检测缺血脑组织中的各型小胶质细胞/巨噬细胞的产物和标志物，结果显示，SR-A-/-小鼠M1型标志物如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）比WT组明显减少，而M2型标志物得到了部分的保留。进一步分析MCAO后小鼠脑组织中的信号通路活性，发现促炎性NF-κB活性明显升高，但SR-A-/-小鼠的升高程度显著低于WT小鼠。应用NF-κB抑制剂并不能减少SR-A-/-小鼠脑组织梗死面积。上述结果表明，小鼠缺失SR-A后，MCAO引起小胶质细胞/巨噬细胞激活减少，同时细胞向M2型转变，导致促炎性细胞因子分泌减少，NF-κB信号通路活性减弱，从而使缺血性脑损伤得到减缓。总之，本研究结果证明，SR-A具有促进小鼠MCAO急性期脑损伤的作用。这一作用的可能机制为：SR-A能够促进脑缺血后引起的小胶质细胞/巨噬细胞的激活，同时促使细胞向M1型转化，使M1/M2比值上升，导致细胞分泌大量的TNF-α、IL-1β和MCP-1等促炎症因子，进而作用于脑组织，激活NF-κB信号通路，，促进神经元凋亡，使梗死面积增大，神经功能损伤。因此，抑制SR-A活性，有望成为干预急性缺血性脑损伤的新选择。
[Abstract]:SR - A is a kind of pattern recognition receptor which is mainly expressed on microglial cells / macrophages and plays a key role in innate immunity and inflammatory response . In most ischemic stroke , ischemia - reperfusion was not performed within 24 hours of the initial phase . Based on this fact , we studied the effect of SR - A on ischemic brain injury by using the model of middle cerebral artery occlusion . The results of flow cytometry showed that SR - A - / - mouse brain tissue infarction area was significantly reduced and neurological function was improved . At the same time , the apoptosis in the infarct - edge region was significantly reduced , suggesting that SR - A gene knockout alleviated the ischemic brain injury caused by the middle cerebral artery occlusion . The results showed that the total amount and proportion of microglia / macrophages activated in the brain tissue of SR - A - / - mice were significantly decreased compared with WT mice . In conclusion , the results show that SR - A has the effect of promoting the brain injury in the acute stage of middle cerebral ischemia . The possible mechanism of this function is that SR - A can promote the activation of microglial cells / macrophages after cerebral ischemia , and increase the ratio of M1 / M2 to increase the ratio of M1 / M2 to the brain tissue , activate NF - 魏B signaling pathway , promote neuronal apoptosis , increase infarct size and nerve function . Therefore , the inhibition of SR - A activity is expected to be a new choice for the intervention of acute ischemic brain injury .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392

【共引文献】