1,25-二羟基维生素D3对HaCaT细胞microRNAs表达谱的影响
发布时间:2018-01-03 12:31
本文关键词:1,25-二羟基维生素D3对HaCaT细胞microRNAs表达谱的影响 出处:《中南大学》2012年硕士论文 论文类型:学位论文
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【摘要】:目的:高通量检测1,25二羟基维生素D3对永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞microRNAs (miRNAs)表达谱的影响,筛选1,25二羟基维生素D3的作用靶点,为揭示1,25二羟基维生素D3治疗银屑病的分子机制奠定基础。 方法:按照1×105个/孔密度接种HaCaT细胞于六孔板,加入含有10%胎牛血清的DMEM培养基,5%二氧化碳培养箱中37℃培养,待细胞融合度达70%,培养基中加入1,25二羟基维生素D3(10-6M),继续培养48小时后,收集细胞提取细胞总RNA,利用miRNA芯片高通量筛选1,25二羟基维生素D3处理组与对照组之间miRNA表达谱差异,选取有显著差异的(?)niRNA,利用实时定量PCR(realtime PCR)方法验证芯片结果。 结果:miRNAs芯片结果显示:与对照组相比,1,25二羟基维生素D3处理组中表达上调3倍及以上的miRNAs (Fold Change cut-off:3.0)共89个,表达下调3倍及以上的miRNAs共43个。其中上调最显著的前十位miRNAs分别是:hsa-miR-340-3p、hsa-miR-2113、hsa-miR-550b-3p、hsa-miR-520d-5p、ebv-miR-BART18-3p、hsa-miR-374c-3p、has-miR-4292、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-221-5p、hsa-miR-668;下调最显著的前十位miRNAs分别是hsa-miR-331-3p、hsa-miR-429、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-31-3p、hsa-miR-3653、hsa-miR-182-5p、 hsa-miR-339-5p、hsa-miR-181d、hsa-miR-194-3p。进一步我们选择三个满足以下条件的miRNAs(miR-99b-5p、miR-222-3p、miR-205-5p),即1.表达差异大于3倍,2.在银屑病患者皮损组织中异常表达,采用realtimePCR验证芯片检测的可靠性。PCR结果显示:与对照组相比,1,25二羟基维生素D3处理组中miR-99b-5b表达显著升高(约2.37倍),miR-222-3p和miR-205-5p表达水平显著降低(分别约3.05和约4.85倍),与芯片检测结果一致,表明芯片结果具有一定的可靠性。 结论:1,25二羟基维生素D3可调控角质形成细胞HaCaT细胞株中大量miRNAs表达。miR-99b-5p、miR-222-3p及(?)niR-205-5p可能是1,25二羟基维生素D3作用的靶点。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of 1m25 dihydroxyvitamin D3 on the expression profile of immortalized human keratinocytes HaCaT cell line microRNAs miRNAs. The target of 25-dihydroxyvitamin D _ 3 provides a basis for revealing the molecular mechanism of 1-dihydroxyvitamin D _ 3 in the treatment of psoriasis. Methods: HaCaT cells were inoculated on six-well plate according to 1 脳 105 / well density and cultured at 37 鈩,
本文编号:1373903
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